梁浩坚+汪传喜+许结仪+郑优荣+李仲平+蓝岚茵+林诗雅
[摘要]意图评价核酸检测技能应用于广州区域无偿献血者血液筛查的成效。办法选用Grifols公司（原诺华确诊公司）PROCLEIX TIGRIS全主动核酸检测剖析体系和PROCLEIX ULTRIO HIV-1/HCV/HBVAssay核酸检测试剂，对2011年1月～2014年12月的1 146 740例无偿献血者血液标本进行HIV/HCV/HBV三项单人份核酸检测，一起选用血清学试剂进行HBsAg，HCVAb，HIVAb/Ag检测。对核酸检测独自反响性标本（血清学阴性，核酸检测反响性）进行辨别实验以断定感染病毒品种。成果1146740例献血者血液标本，核酸检测的反响性比率为0.97%（10 645/1146 740），低于血清学HBsAg，HCVAb，HIVAbAg三项总的检测阳性率1.66%（19024/1146740）。在1114428例经血清学全项检测合格的标本中，单人份核酸检测共检出2457例核酸反响性样本，核酸独自反响性比率为0.22%；在2457例核酸独自反响性标本中，辨别实验反响性的样本为718例，其间，HBV-DNA 711例，HCV-RNA4例，HIV-RNA 3例。核酸辨别实验阳性率为29.22%（718/2457）。定论现在在广州区域输血传达疾病的剩余危险首要仍是输血感染HBV。核酸检测技能应用于血液筛查，将有助于缩短病原体检测的窗口期，下降输血剩余危险，血清学和核酸检测两种办法互为弥补，应一起运用以确保血液安全。
[关键词]核酸检测；血液筛查；输血危险；血液安全；转录介导扩增技能
输血相关盛行症的防备和操控是全社会重视的焦点之一。2010年，国家卫生与计划生育委员会（原卫生部）断定在全国15家采供血组织展开核酸检测（NAT）试点工作，以进一步确保血液检测质量，进步我国无偿献血者血液检测水平。到现在NAT技能现已广泛运用于全国各地血站的血液筛检。该技能的检测灵敏度较ELISA检测办法高，能显着缩短病原体检测的窗口期，然后下降输血传达病毒的剩余危险50%以上。但NAT技能从理论上并不能彻底消除“窗口期”，国外已有经核酸检测后仍发作输血后感染的病例报导，包含HIV和HBV。本中心2010年11月正式将NAT技能应用于血液筛查项目中，对悉数无偿献血者血液标本进行HBV DNA、HCV RNA和HIV RNA核酸检测。本研讨经过对无偿献血者血液标本的惯例血清学及核酸检测成果的剖析，以评价核酸检测的检测成效，以及本地献血者人群的感染状况。现将检测成果报导如下。
1材料与办法
1.1一般材料
2011年1月～2014年12月，广州血液中心收集的无偿献血者血液标本1146740例。一切无偿献血者均契合现行的卫生部《献血者健康检查要求》（GB18467-2011）。血液收集后一起留取核酸检测标本和酶免检测标本管各一支。核酸检测标本收集、保存和处理等均严厉依照卫生部核酸检测试点技能要求操作。
1.2首要仪器与试剂
核酸检测仪器：Grifols公司（原诺华确诊公司）PROCLEIX TIGRIS全主动核酸检测剖析体系，试剂装备恒温箱（RPI）。试剂为PROCLEIXULTRIO Assay核酸联检试剂盒和核酸辨别试剂盒（Discriminatory Assay）。核酸检测试剂批号：（593226，614952，624775，116153等）。血清学检测仪器：STAR全主动加样仪和全主动酶联免疫剖析仪（FAME24/30）。ELISA检测首要试剂包含乙肝表面抗原试剂盒（法国梅里埃，批号B11FA，20110704；上海科华：批号201101031，201201011，201302011）、丙型肝炎抗体试剂盒（美国强生ORTHO：批号EXE187，EXE208；上海科华：批号201103011，201202031，201303011）及人类免疫缺点病毒（HIVl/2）抗原抗体检测试剂盒（法国伯乐，批号1F0189，280213，3F0259；北京万泰，批号1201 10204，120121 120，12013 1022）。
1.3检测战略
血液标本选用血清学和NAT并行检测操作战略；对核酸检测独自反响性标本进行分项辨别实验。
1.4检测办法
选用PROCLEIX TIGRIS 全主动核酸检测剖析体系（TMA办法）对血液核酸标本进行单人份联合检测（HIV-1/HCV/HBV）；对核酸检测独自反响性标本进行分项辨别实验；核酸检测成果反响性成果由检测体系软件主动断定，其断定标准为样本的S/CO值≥1。选用两种不同厂家的ELISA试剂对献血者标本进行血清学HBsAg、HCVAb、HIVAgAb检测，严厉执行说明书进行相关操作，经过阴阳性对照及室内质控品来操控试剂盒的质量和检测的有效性；血清学检测成果阳性的断定：样本OD≥cut off值。
1.5检测原理
Grifols核酸检测试剂是以转录介导的扩增（transcription-mediated amplification，TMA）技能原理来检测病毒核酸的办法。其检测基本原理是：运用特异性的方针捕获试剂和磁微珠别离纯化被检测病毒核酸分子，再经过TMA技能来扩增HBVDNA、HCV RNA和HIV-1 RNA（1型）的核酸片断，最终经过杂交维护（HPA）办法检测扩增产品。试剂中含有内标分子，用以监测整个反响进程，避免出现假阴性成果。
1.6计算学办法
选用SPSS17.0计算软件进行处理和剖析，对计数材料进行x2查验，P<0.05为差异具有计算学含义。
2成果
2.1血清学与核酸检测成果的比较
对1 146 740例献血者血液标本，核酸检测的阳性检出率为0.97%，低于血清学（HBsAg，HCVAb，H1VAbAg三项之和）的检测阳性率1.66%，二者之间的差异具有计算学含义（x2=2128.4，P<0.05），见表1。
2.2核酸检测
4年中Grifols单人份核酸检测体系的总阳性率为0.97%，而且阳性率出现逐年缓慢添加的趋势。在对每年的检测阳性率进行比较时，各年度间检测阳性率未见计算学含义（x2=2.442，P<0.05），见表2。
2.3血清学合格标本中核酸检测状况
在1114428例血清学检测合格标本中，单人份核酸检测共检出2457例核酸反响性样本，核酸独自反响性比率为0.22%；在对每年检测阳性率进行比较时，各年度间血清学检测合格标本其NAT检测阳性率之间的差异具有计算学含义（x2=16.506，P<0.05），见表3。
2.4核酸辨别成果
在2457例核酸独自反响性标本中，辨别实验反响性的样本为718例，其间，HBV-DNA 711例，HCV-RNA 4例，HIV-RNA 3例，献血者中核酸独自阳性的样本大多归于HBV感染，HBV DNA辨别阳性率与别的两者间的差异具有计算学含义（x2=2091.464，P<0.05）。核酸辨别实验总阳性率为29.22%（718/2457）。见表4。
3评论
现在，国内外应用于血液筛查的核酸检测技能首要有TMA及PCR两种。我中心运用的是Grills公司根据TMA技能的核酸检测试剂，对悉数献血者样本进行单人份核酸检测。这种检测办法的灵敏度高，反响条件简略，扩增效率高，能够避免低复制的病毒阳性血液的漏检。其剖析灵敏度为：HBVDNA 10.4IU/mL，HCV RNA 3.0IU/mL和HIV RNA45.0IU/mL。而且该办法的整个反响进程在1个试管中进行，因而也减少了污染发作的或许。本研讨显现，广州区域无偿献血者血液标本的核酸阳性检出率显着低于酶免检测项目阳性检出率（P<0.05）。在一切因输血传达病毒项目检测不合格而筛选的21481份标本中，血清学和NAT共同阳性的仅有8616份（占40.1%），而血清学独自阳性的有10408份（占48.5%），NAT独自阳性的有2457份（占11.4%）。关于这部分检测成果不共同的状况，一方面是因为血清学和核酸检测都存在检测的假阳性的或许，另一方面也说明晰血清学和核酸检测二者具有的互补效果。因而在现在的技能条件下，血清学和核酸检测对献血者的筛查是缺一不行的。
在献血者血液筛查中引进核酸检测技能，其首要意图是检测出原有血清学检测或许漏掉的具有感染性的献血者样本。在本研讨中的1114428份血清学检测合格标本中，单人份核酸检测共检测出反响性样本2475例，阳性检出率为0.22%（2457/1114428），成果显着高于大连和沈阳区域0.07%，这或许与各区域病毒盛行率差异、检测样本数量、运用试剂差异，以及检测形式（单人份与多人份混样检测）不同有关。在对这些核酸独自阳性样本的辨别检测中，共检出718例阳性成果，辨别阳性检出率为29.22%。这个辨别率与汪德海等报导的共同，而低于大连，杭州等地的数据。而出现核酸检测联检反响性，而辨别实验悉数为非反响性的原因或许有：（1）联检成果假阳性。这或许是因为酶免及核酸检测平行进行，检测人员若操作不标准，导致阳性标本的小范围污染，添加联检成果假阳性的或许；或因为检测试剂自身的非特异性反响。（2）辨别实验的假阴性。如病毒浓度处于极低的浓度水平，因为病毒颗粒在血浆中的泊松散布，导致取样时未能吸取到带有病毒的样本；或或许是因不合适的贮存条件，不良的运送，搅扰物质的存在，导致样本中病毒的降解，也会形成辨别实验假阴性的成果。因为我国乙肝的盛行率相对较高，因而献血者中核酸独自阳性的样本大多归于HBV感染。而HBV感染，特别是隐匿性乙肝感染（OBI）的病毒浓度一般很低，因而出现上述低浓度样本的或许性很大。已有文章报导，关于不行辨别的样本，选用其他核酸检测办法，或乙肝感染标志物（如乙肝中心抗体）进行检测时，部分样本依然出现阳性成果。提示这些不行辨别的样本中存在必定份额的真阳性。
从成果中能够看出现在广州区域无偿献血者的HBV感染率较高，输血传达HBV剩余危险显着高于HCV和HIV，从核酸辨别实验数据剖析，在718例辨别阳性成果中，HBV DNA阳性711例，占99.03%。文献报导，HBV输血剩余危险首要来自于血清转化前的窗口期、变异病毒株和隐匿性HBV感染3个方面。其间献血者中的HBV DNA独自阳性者大部分归于隐匿性HBV感染，标明输血剩余危险首要来自于隐匿性HBV感染。本文检出HCV RNA 4例和HIV RNA 3例，其间HCV RNA及HIV RNA各一例送卫生部临检中心验证为阴性。别的2例HIV RNA因献血者联系电话刊出，无法进行随访追寻，3例HCV RNA中2例经确证为阳性。在2015年辨别实验中，又发现HIV RNA阳性2例，送惠州市中心血站作定量检测后确证为HIV阳性。经随访追寻献血者，一周后再进行检测，血清学及核酸检测均为阳性，因而断定该2例标本为HIV“窗口期”感染。
血清学检测的是抗原或抗体，NAT检测的是病毒核酸，核酸检测能从血清学检测阴性的标本中检出漏检的病毒感染者，是血清学检测的有力弥补，我国许多城市自引进核酸检测后也多有这方面报导。在本研讨中的1114428份血清学检测合格标本中，单人份核酸检测共检测出反响性样本2475例（0.22%），证明核酸检测的必要性。将NAT技能应用于血液筛查，能够显着下降因血清学漏检而导致的输血传达疾病的剩余危险，进一步进步血液安全，以确保临床用血安全。
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