姜黄 郑丽华 杨金花
[摘要]意图讨论多聚酶链反响（PCR）检测免疫球蛋白重链基因重排在原发性胃肠道淋巴安排增生性疾病中的良恶性辨别中的使用价值。办法选取存档蜡块45例，选用HE惯例染色及SP免疫组化办法进行安排学分类，运用PCR半巢式扩增免疫球蛋白重链基因重排，2%琼脂糖凝胶电泳检测PCR产品。成果IgH FR3A和IgH FR3A+FR2A在MALT淋巴瘤的阳性检测率分别为60.7%（17/28）和75.0%（21/28），在DLBCL中的阳性检测率分别为60.0%（9/15）和73.3%（11/15），在MCL中的阳性检测率分别为100.0%（1/1）和100.0%（1/1）。IgH FR3A在胃肠道淋巴瘤中的阳性检测率为60.0%。IgH FR3A联合IgH FR2Ad在胃肠道淋巴瘤中的阳性检出率为73.3%（33/45）。定论选用PCR办法检测免疫球蛋白重链基因重排可以作为淋巴瘤确诊的有用辅佐手法，有助于对原发性胃肠道淋巴安排增生性疾病的良恶性做出正确的确诊。
[关键词]胃肠道淋巴瘤；非霍奇金淋巴瘤；基因重排；多聚酶链反响；免疫球蛋白重链基因
[中图分类号]R733
[文献标识码]A
[文章编号]2095-0616（2016）03-29-04
淋巴瘤是起源于淋巴安排及淋巴结的恶性肿瘤，原发性胃肠道淋巴瘤是结外淋巴瘤的最好发部分。原发性胃肠道淋巴瘤占结外淋巴瘤的30%～45%。原发性淋巴瘤因为其临床表现无特殊性，尤其在前期的恶性淋巴瘤因为其更缺少特异性，因而临床较难做出正确确诊，易形成误诊。病理确诊淋巴瘤较为牢靠，凭借形态学和免疫安排化学能对大部分淋巴瘤做出清晰的确诊，但对一些疑问病例依然不能做出正确确诊，未能得到及时的正确确诊不利于临床医师做出最佳的医治计划和进行必要的预后评价。近年来，针对淋巴瘤免疫球蛋白重链（immunoglobulin heavy chain，IgH）基因重排检测已经成为临床上确诊淋巴瘤的一项必要手法，成为辨别确诊淋巴瘤的一种新的有力东西，
本研讨对此进行开始研讨。
1.材料与办法
1.1一般材料
搜集2008年10月～2014年10月郑州人民医院收治胃肠道B细胞非霍奇金淋巴瘤（Bcell non-Hodgkin lymphoma，B-NHL）45例，来自内镜活检和手术标本均经病理证明。男27例，女18例，年纪21-77岁（中位年纪52岁）。阳性对照为Raii细胞株，阴性对照为1例淋巴安排反响性增生。
1.2临床表现
45例胃肠道B-NHL患者中呈现腹痛37例（82.2%），腹胀10例（22.2），血便10例（22.2%），发热8例（17.8%），腹部包块7例（15.6%），黑便6例（13.3%），消瘦5例（11.1%），黏液便5例（11.1%），腹泻2例（4.4%）。45例病变累及胃21例（46.7%），小肠2例（4.4%），回盲部3例（6.7%），结肠10例（22.2%），直肠3例（6.37%），小肠兼并结肠1例（2.7%）。其间表现为淋巴结搬运26例（57.8%），未查见淋巴结搬运19例（42.3%）。
1.3办法
1.3.1免疫组化一切标本经中性福尔马林固定、惯例白腊包埋、4-5um接连安排切片，除进行惯例HE染色以外，选用免疫组化S-P法进行免疫表型符号：LCA（2B11，DAKO）、CD3（F7.2.38，DAKO），CD45RO（OPD4，DAKO）、CD20（L26，DAKO）、CDIO（MX002，DAKO）、CDl5（Carb-3，DAKO）、CD30（Ber-2、DAKO）、Bcl-2（SP66，DAKO）、Bcl-6（LN22，DAKO）、CyclinD-1（DCS-6，DAKO）、PAX-5（SP34，DAKO）、kappalight chain（L1C1，DAKO）
和lambda light chain（LAM03+HP6054，DAKO）符号轻链。依据不同免疫表型表达状况并依据2008年WHO淋巴及造血体系肿瘤分类规范对一切病例进行分类。
1.3.2安排分型惯例HE制片，结合免疫组化成果，一切病例经由2位以上病理学专家一起阅片确诊为非霍奇金B细胞淋巴瘤，其间胃肠道黏膜相关淋巴瘤（mucosa associated lymphoid tissuelymphoma，MALT）28例，充满大B细胞淋巴瘤（diffuse large B cell lymphoma，DLBCL）15例，滤泡性淋巴瘤（follicular lymphoma，FL）1例，套细胞淋巴瘤（mantle cell lymphoma，MCL）1例。
1.3.3DNA提取及半巢式PCR反响白腊安排10um接连切片5张，惯例酚一氯仿法抽提DNA。选用半巢式PCR。一致性v区引物（FR2A）：5TGGA/GTC CGC/A CAG G/CCT/C T/CCN GG 3一致性V区引物（FR3A）：5ACA CGG C（C/T）（G/C）TGT ATT ACT GT 3，（J区引物）LJH：5TGAGGA GAC GGT GAC C 3，（J区引物）VLJH：5GTG ACC AGG GT（A/G/C/T）CCT TGG CCCCAG 3。进行半巢式反响，第一轮PCR用引物FR3A（FR2A）+LJH，其产品稀释100倍作为模板，FR3A（FR2A）+VLJH进行第二轮PCR反响。总体积25uL：10×buffer 2.5uL，MgCl，1.8uL（终浓度1.8mM），dNTP 1.5uL（终浓度10uM），引物各0.2uL终浓度200nM），TaqPlus酶0.2uL（1u），模板DNA 1UL，体积缺乏部分双蒸水补足。一切PCR反响均在94℃预变性6min，94℃变性lmin，55℃退火lmin，72℃延伸lmin，40个循环，反响完毕后在72℃延伸10min，然后4～C放置。产品长度70-130bp。已知阳性病例做阳性对照，反响性淋巴安排增生做阴性对照，缓冲液做空白对照。扩增产品行2%琼脂糖凝胶电泳。所需引物和试剂均购自上海生工公司。
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