张洪亮++范华东++陆华东
[摘要] 意图 剖析大容量双肺灌洗（Massive whole-lung lavage，MWLL）对煤尘肺患者免疫细胞及细胞因子的影响，为煤尘肺患者的医治供给依据。 办法 对70例煤尘肺患者施行MWLL医治，共灌洗10～15次，医治前、医治后选用酶联免疫吸附法检测血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、Clara细胞排泄蛋白-10（CC-10）、转化因子-β1（TGF-β1），选用流式细胞仪检测外周血T细胞亚群。 成果 医治后Ⅰ期、Ⅱ期患者CD4+、CD8+、CD4+/CD8+比值、TNF-α、TGF-β1、CC-10与医治前比较，差异有统计学含义（P<0.05或P<0.01）；Ⅲ期患者医治后CD4+、CD4+/CD8+比值、TNF-α、TGF-β1与医治前比较，差异有统计学含义（P<0.05），但医治前、后CD8+、CC-10比较，差异无统计学含义（P>0.05）。 定论 MWLL医治在短期内能改进煤尘肺患者的体液免疫及细胞免疫。
[关键词] 煤尘肺；大容量双肺灌洗；T细胞亚群；细胞因子
[中图分类号] R472 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2015）01-0013-03
Massive whole-lung lavage impact on immune cells and cytokines in patients with pneumoconiosis
ZHANG Hongliang1 FAN Huadong1 LU Huadong2
1.Changguang Group Iimited Iiability Company Worker's Hospital，Huzhou 313117， China；2.Respiratory Department， Huzhou City Centre Hospital in Zhejiang Province，Huzhou 313000， China
[Abstract] Objective To analyze MWLL impact on immune cells and cytokines in patients with pneumoconiosis，and to provide the basis for coal pneumoconiosis patients. Methods 70 cases of pneumoconiosis implement MWLL treatment of lavage 10 to 15 times，by enzyme-linked immunosorbent assay of serum tumor necrosis factor-α（TNF-α），Clara cell secretory protein 10（CC-10），transforming growth factor-β1（TGF-β1），the use of flow cytometry in peripheral blood T cell subsets before and after treatment. Results CD4+，CD8+，CD4+/CD8+ratio，TNF-α，TGF-β1，CC-10 of periodⅠ，Ⅱpatients，the difference was statistically significant after treatment compared with before treatment （P<0.05 or P<0.01）； CD4+，CD4+/CD8+ratio，TNF-α，TGF-β1 of period Ⅲ patients，the difference was statistically significant after treatment compared with before treatment（P<0.05，but the difference of CD8+，CC-10 was not statistically significant（P>0.05）. Conclusion MWLL treatment can improve coal pneumoconiosis humoral and cellular immunity in the short term.
[Key words] Coal pneumoconiosis； Lavage lung capacity； T cell subsets； Cytokine
煤尘肺多因患者长时间暴露在高粉尘环境中，煤尘堆积在肺内所造成的[1]。但是，临床关于煤尘肺的详细发病机制现在尚无定论，可能与煤尘堆积引发的细胞免疫紊乱及炎性反响有关[2]。大容量双肺灌洗（MWLL）最早是用于医治肺泡蛋白冷静症，其通过铲除冷静的蛋白而改进患者体液免疫及细胞免疫功用，进而到达医治的意图。本文对70例煤尘肺患者施行MWLL医治，剖析其对患者T免疫细胞亚群及与煤尘肺相关的细胞因子的改动，现报导如下。
1 材料与办法
1.1 一般材料
选取2011年1月～2014年1月到长广医院就治的煤尘肺患者70例。当选规范：①契合《尘肺病确诊规范》（GBZ70-2009）中相关确诊规范[3]，并经高仟伏X射线胸片查看确诊；②契合MWLL医治指征；③触摸煤尘、岩尘、混合粉尘的混合性或单纯尘肺患者。扫除规范：①年纪>65岁；②心肺功用低下、凝血功用障碍、伴有严峻支气管变形者；③伴有活动性肺结核者；④近2周有肺部感染、哮喘体现。70例均为男性，其间Ⅰ期28例，年纪35～59岁，均匀（51.3±8.2）岁；触摸粉尘年限10～32年，均匀（22.1±7.7）年；Ⅱ期32例，年纪32～60岁，均匀（50.7±8.1）岁；触摸粉尘年限8～33年，均匀（22.5±7.5）年；Ⅲ期10例，年纪30～57岁，均匀（51.2±8.3）岁；触摸粉尘年限7～34年，均匀（22.6±7.8）年。三组一般材料比较无统计学含义（P>0.05），具有可比性。
1.2 MWLL办法
70例均在静脉复合麻醉下施行MWLL医治。患者取平卧位或取灌洗侧居上斜卧位（25°～30°），衔接Solar多功用监护仪，将双腔支气管导管（RoberFshaw 管）刺进患者支气管及气管，承认双肺阻隔满足后，一侧肺给予纯氧通气，另一侧选用细支气管镜查看断定球囊定位杰出后开端灌洗，一般先右后左。在灌洗前将灌洗液加温至37℃，初次灌洗500 mL，调查患者心电图、血氧饱和度等无反常则重复灌洗。依据肺容量每次灌入量1000～2000 mL，随后负压4～5 kPa吸出等量的肺灌洗液，于第3、6、9次负压吸出灌洗液末给予加压纯氧通气，加压最大压力<4 kPa，负压吸出与正压通气要替换进行，重复灌洗[4]。一侧灌洗完毕后，待残留液根本吸收，患者呼吸根本康复、肺顺应性挨近灌洗前水平，生命体征平稳后，以相同办法换另一侧灌洗，双肺共灌洗10～15次，直至灌洗收回液变清亮停止，一般一侧灌洗次数<12次。
1.3 检测办法
医治前2 d及MWLL灌洗完毕后2 d别离抽取空腹静脉血4 mL。取2 mL静脉血置于EDFA抗凝管中，选用Beckman流式细胞仪（美国出产）检测F淋巴细胞亚群CD4+、CD8+占细胞总数的份额，并核算两者的比值。试剂购于美国BD公司，选用CD4+FITC、CD8+PE鼠抗人荧光符号抗体。再取2 mL进行3000 r/min离心处理10 min，取上层血清，置于-20℃冰箱中保存。12 h内选用双抗酶联免疫吸附法检测血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、Clara细胞排泄蛋白-10（CC-10）、转化因子-β1（TGF-β1）。仪器为ELX800酶标仪（美国出产），试剂盒购于深圳晶美生物工程有用公司。
1.4 统计学办法
选用SPSS 17.0软件包对数据进行统计学剖析，计量材料用（x±s）表明，组间比较选用F查验，P<0.05为差异有统计学含义。
2 成果
2.1 医治前、后免疫细胞改动
Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期患者医治后CD4+、CD4+/CD8+比值高于医治前，Ⅰ期、Ⅱ期患者医治后CD8+低于医治前，差异有统计学含义（P<0.05）；Ⅲ期患者CD8+医治前、后比较，差异无统计学含义（P>0.05），见表1。
2.2 医治前、后细胞因子改动
Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期患者医治后TNF-α高于医治前，TGF-β1显着低于医治前；Ⅰ期、Ⅱ期患者医治后CC-10高于医治前，差异有统计学含义（P<0.05），但Ⅲ期患者CC-10医治前、后比较，差异无统计学含义（P>0.05），见表2。
3 评论
我国是煤尘肺的高发区域，据统计我国煤尘肺患者约有100万人，占全世界的50%以上，并且每年新增600例以上[5]，对患者日子质量及生计带来巨大要挟。
煤尘堆积引发煤尘肺的机制杂乱，但其病因清晰。粉尘滞留在毛细支气管及肺泡上引发炎症反响及吞尘使巨噬细胞添加是煤尘肺的首要致病要素[6]。Toru等[7]研讨发现，在煤尘肺开展过程中，有很多的活性介质及细胞因子参加，一起伴有免疫功用失衡。Rong等[8]研讨报导，在煤尘肺开展过程中，各种炎性介质及细胞因子体现出不同的改动，最典型的是TNF-α下降、TGF-β1升高、白细胞介素-6（IL-6）升高。一起T细胞亚群在数量及份额上也有所改动，如CD4+下降，CD8+升高，CD4+/CD8+下降等。本研讨中煤尘肺患者医治前均伴有TNF-α下降，FGF-β1升高，CD4+下降， CD8+升高，CD4+/CD8+下降等体现，尤其是Ⅲ期患者上述细胞因子及免疫细胞改动更显着，与文献报导根本相符，证真实煤尘肺开展中伴有免疫功用及细胞因子失调。
MWLL最早是用于医治肺泡蛋白冷静症[9]，因为其能有用铲除残留在肺泡内的粉尘、炎性细胞及巨噬细胞等而在煤尘肺的医治中广泛适用，但其医治机制现在没有清晰，临床估测其可能通过改进机体免疫功用及纠正细胞因子紊乱而完成医治意图[10]。煤尘肺患者肺泡内很多堆积的难溶性煤尘对巨噬细胞有毒性作用，导致肺泡内巨噬细胞凋亡，使得TNF-α组成及开释削减，严峻影响机体免疫功用。Steffen等[11]研讨报导，MWLL可将堆积在肺泡内的沉渣、粉尘铲除，机体内环境得到改进，TNF-α的开释添加。我国学者蔚岩等[12]研讨得到相同的定论，机体吸入很多的粉尘后，粉尘直接损害Clara细胞、巨噬细胞，使得CC-10蛋白、TNF-α的组成及开释削减，跟着机体粉尘的铲除，CC-10、TNF-α的含量逐步上升。本研讨中Ⅰ期、Ⅱ期患者医治后CC-10、TNF-α均有显着上升，提示MWLL可纠正机体细胞因子紊乱。TGF-β1是肺部纤维化开展的重要调理因子，其通过上调纤维粘连蛋白与胶原蛋白基因的表达而降低蛋白酶的排泄，然后参加尘肺的纤维化进程[13]。本研讨中，Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期患者医治前TGF-β1显着升高，尤其是Ⅲ期患者的TGF-β1含量是普通人的3倍。张志对等[14]研讨以为，煤尘肺患者TGF-β1含量升高的原因是粉尘中含有很多的SiO2，SiO2可激活网状内皮体系物质，其间包含TGF-β1，进而促进胶原纤维纤维化进程。本研讨中，医治后Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期患者TGF-β1显着低于医治前（P<0.05），可能与MWLL将堆积在肺内的SiO2铲除有关。
国内外研讨均证明，煤尘堆积在肺泡内损害巨噬细胞，一方面可促进炎性细胞的开释而发生炎症反响；另一方面可开释一种激烈的内源性免疫按捺剂前列腺素 E2（PEG2），使T细胞免疫功用瘫痪[15]。本研讨中Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期患者医治前CD4+下降，CD8+升高，CD4+/CD8+下降，免疫功用遭到必定按捺。MWLL医治后，Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期患者医治后CD4+、CD4+/CD8+比值高于医治前，Ⅰ期、Ⅱ期患者医治后CD8+低于医治前（P<0.05），与Ga■Fane等[16]报导根本相符，证明MWLL可改进煤尘肺患者的细胞免疫功用。
值得注意的是，因为晚期煤尘肺（Ⅲ期）患者肺纤维化程度严峻，临床以为晚期煤尘肺患者洗肺医治的收效甚微，往往抛弃洗肺医治。本研讨中，Ⅲ期患者通过MWLL医治后，T细胞亚群、细胞因子的改动尽管没有Ⅰ期、Ⅱ期患者的显着，或所需的阶段较长，但医治后TNF-α、TGF-β1、CD4+、CD4+/CD8+比值与医治前比较有显着差异（P<0.05），提示对Ⅲ期煤尘肺患者进行全肺灌洗的重要性。
综上所述，MWLL医治在短期内能改进煤尘肺患者的体液免疫及细胞免疫。
[参考文献]
[1] 李国锋，王月罡. 依托咪酯乳剂用于大容量肺灌洗术的作用调查[J]. 我国现代医师，2012，50（1）：96-98.
[2] 袁扬，黄京慧，陈刚，等. 大容量全肺灌洗医治尘肺病术中肺顺应性的改动[J]. 工业卫生与工作病，2009，35（5）：274-275.
[3] GBZ70-2009，尘肺病确诊规范[S].
[4] 张小明，齐兵. 双肺同期大容量肺灌洗术医治煤工尘肺[J].工作卫生与病伤，2012，27（6）：385-386.
[5] 许金桂. 支气管肺泡灌洗对煤工尘肺动脉血气及肺功用的影响[J]. 南华大学学报（医学版），2010，38（5）：688-689.
[6] 张辉，张小燕，何彩霞，等. 经纤支镜肺泡灌洗医治机械通气下重症肺部感染的效果调查[J]. 我国现代医师，2014，52（1）：140-142.
[7] Toru A，Yoshikazu I，Chikatoshi S，et al. CYFRA 21-1 as a disease severity marker for autoimmune pulmonary alveolar proteinosis[J]. Respirology，2013，85（11）：120-127.
[8] Rong LL，Pin HP，Yuan YL，et al. Large-capacity whole-lung lavage in 1 patient with pulmonary alveolar proteinosis and severe hypoxemia and literature review[J]. Medical Sciences，2012，37（10）：1672-1677.
[9] 叶钧强. 经纤支镜支气管肺泡灌洗办法医治严峻肺部感染剖析[J]. 我国现代医师，2013，51（6）：120-123.
[10] 张道纪. 经纤支镜肺灌洗医治煤工尘肺并肺部感染35例[J]. 临床肺科杂志，2010，15（3）：393-394.
[11] Steffen L，Elisabeth B，Hanne V，et al. Autoimmune pulmonary alveolar proteinosis：Treatment options in the year 2012[J]. Respirology，2012，84（10）：147-183.
[12] 蔚岩，马冬，闫立成，等. 煤工尘肺支气管肺泡灌洗液CC-10及TNF-α含量剖析[J]. 我国工业医学杂志，2011， 24（1）：57-58.
[13] Vanderhelst E，Hanon S，Verbanck S，et al. Whole-lung lavage：A successful treatment for restoring acinar ventilation distribution in primary acquired pulmonary alveolar proteinosis[J]. Respirology，2012，84（1）：147-183.
[14] 张志平，赵月明，陈小刚，等. 双肺同期大容量灌洗医治煤工尘肺的临床研讨[J]. 江西医药，2010，45（2）：132-133.
[15] 张楠，刘建坤，王洪武，等. 煤工尘肺患者双肺大容量灌洗前后肺功用与6分钟步行实验改动的研讨[J]. 南京医科大学学报（自然科学版），2010，30（3）：412-415.
[16] Ga■tane M，Chakravarthy R，Armin E. Whole-lung lavage for pulmonary alveolar proteinosis[J]. Chest，2009，136（6）：1678-1681.
（收稿日期：2014-06-05）
根据您访问的内容，您可能还对以下内容感兴趣，希望对您有帮助：