张巍 邵亮堂 刘文宗 张海丛 闫会敏 郑欢伟
[摘要]意图 探討肝动脉化疗栓塞术（TACE）术后肝衰竭的发作与髓源性免疫按捺细胞（MDSC）表达的联系。办法 选取2011年5月～2015年1月住院的237例乙肝病毒（HBV）相关原发性肝癌（PLC）患者作为研讨目标，依照是否发作肝衰竭分为肝衰竭组（105例）与非肝衰竭组（132例），剖析MDSC表达TACE术后肝衰竭的差异。依照肝衰竭程度分为肝衰竭轻度组（47例）、中度组（31例）、重度组（27例），依照肝衰竭预后分为逝世组（10例）与好转组（95例），比较各组MDSC表达差异。成果 PLC患者肝衰竭组的MDSC-m表型显着高于非肝衰竭组，差异有统计学含义（P=0.0405）。肝衰竭重度组的MDSC-m显着高于轻度组，差异有统计学含义（P<0.001）；肝衰竭逝世组的MDSC-m水平显着高于好转组，差异有统计学含义（P<0.01）。定论 肝动脉化疗栓塞术后肝衰竭发作、预后与MDSC高表达密切相关。
[关键词]肝癌；肝动脉化疗栓塞术；髓源性免疫按捺细胞
[中图分类号] R575.3 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2018）4（a）-0009-04
Analysis of the relationship between expression of myeloid-derived suppressor cell and liver failure after transcatheter arterial chemoembolization
ZHANG Wei SHAO Ming-liang LIU Wen-zong ZHANG Hai-cong YAN Hui-min ZHENG Huan-wei▲
Research Center，the Fifth Hospital of Shijiazhuang，Hebei Province，Shijiazhuang 050021，China
[Abstract]Objective To investigate the relationship between the occurrence of hepatic failure after transcatheter arterial chemoembolization （TACE） and the expression of myeloid-derived suppressor cell （MDSC）.Methods Altogether 237 patients with HBV-related primary liver cancer （PLC） who were hospitalized in our hospital from May 2011 to January 2015 were selected as the subject of this research，according to the the occurrence of liver failure，all patients were divided into 105 cases in liver failure group and 132 cases in non-liver failure group.The difference of MDSC expressions after TACE was analyzed.According to the degree of liver failure，all the patients were divided into mild liver failure group （47 cases），moderate group （31 cases），severe group （27 cases），according to the prognosis of liver failure，all the patients were divided into death group （10 cases） and improvement group （95 cases）.The difference of MDSC expressions in each group was compared.Results The MDSC-m phenotype of the PLC patients in liver failure group was significantly higher than that in the non-liver failure group，with significant difference （P=0.0405）.MDSC-m of severe liver failure group was significantly higher than that of mild group，with significant difference between the two groups （P<0.001）.MDSC-m level of the liver failure death group was significantly higher than that of improvement group，with significant difference between the two groups （P<0.01）.Conclusion The occurrence and prognosis of hepatic failure after TACE is closely related to the high expression of MDSC.
[Key words]Liver cancer；Transcatheter arterial chemoembolization；Myeloid-derived suppressor cell
原发性肝癌（primary liver cancer，PLC）是一种多要素归纳构成的恶性肿瘤之一，原发于肝脏上皮细胞，分为肝细胞癌、肝胆管癌以及混合癌，其生存率低、恶性程度高[1]，病死率居恶性肿瘤的第3位。关于不能采纳彻底治愈手法医治的中晚期PLC患者，肝动脉化疗栓塞术（transcatheter arterial chemoembolization，TACE）医治为非手术医治中的首选办法[2]。研讨发现乙肝病毒激活、免疫应激、肠道菌感染可能诱发肝衰竭，可是内涵的机制仍未清晰[3]。本研讨旨在剖析TACE医治肝癌患者发作肝衰竭与髓源性免疫按捺细胞（myeloid-derived suppressor cells，MDSC）表达相关性，活跃防备肝癌术后肝衰竭，或能及时干涉临床医治计划，进步患者生存率。
1材料与办法
1.1一般材料
选取2011年5月～2015年1月于石家庄市第五医院承受医治的237例乙型肝炎病毒（HBV）相关PLC患者，依照是否发作肝衰竭分为肝衰竭组（105例）与非肝衰竭组（132例）。肝衰竭组中，男71例，女34例（性别比2.08∶1）；年纪30～77岁，均匀（59.36±6.57）岁。非肝衰竭组中，男86例，女46例（性別比1.86∶1）；年纪30～77岁，均匀（59.36±6.57）岁。随访36个月，两组患者的一般材料比较，差异无统计学含义（P>0.05）。归入标准：①确诊契合原发性肝癌医治标准（2011年版）[4]；②病例材料记载完好者；③患者能够继续随访者。扫除标准[5]：①非原发性肝癌的患者，如肉瘤、恶性淋巴瘤、转移性肝癌等；②脏器严峻衰竭，顽固性很多腹腔积液，显着的恶病质；③患者无法再次随访者。本实验计划经医院医学道德委员会批阅，并与入组患者签署知情同意书。依据2012年中华医学会感患病学分会《肝衰竭医治攻略》，在肝衰竭确诊建立的基础上，肝衰竭前期标准为：30%<凝血酶原活动度（PTA）≤40%或1.5<凝血酶纠正因子（INR）≤1.9，未呈现并发症；肝衰竭晚期标准为：PTA≤20%或INR≥2.6，并呈现下列任何之一，如肝肾归纳征、消化道大出血、Ⅱ度以上肝性脑病（不含Ⅱ度）、严峻感染。
1.2医治办法
TACE医治选用惯例计划[6]，即患者平卧位，术野惯例消毒、铺无菌单，取右侧腹股沟韧带下1.5 cm股动脉搏动最显着处为穿刺点。用2%利多卡因5 ml部分麻醉。穿刺右股动脉，成功后刺进4F导管鞘，将4FRH导管于第十二胸椎上缘置入腹腔动脉；用高压注射器以5 ml/s、共15 ml造影，显现肝、脾动脉走行、肝右叶肿瘤供血动脉印象。用微导管超挑选肝右肿瘤供血动脉，用高压注射器以3 ml/s造影；在X线监督下经导管给予碘化油（负荷昂丹司琼针4 mg、地塞米松针6 mg、氟尿嘧啶针1.0、丝裂霉素针20 mg、顺铂针60 mg）15 ml经微导管缓慢注入靶血管，瘤结节逐步浓染，碘化油均匀沉积到肿瘤内。拔出导管及导管鞘，右股动脉穿刺处动脉压榨止血15 min，加压包扎。
1.3试剂与办法
1.3.1首要试剂和仪器 人淋巴细胞别离液（Ficoll）购于天津灏洋生物制品科技有限公司；磷酸盐缓冲液（FBS）购于美国Gibco公司，人单克隆荧光抗体髓系细胞分化抗原（CD33-PE-Cy5）购于美国Biolegend公司，中性粒细胞黏附因子（CDll b/Mac-1-PE-Cy7）抗体、抗原呈递细胞相关人类白细胞Ⅱ抗原（HLA-DR-APC）抗体、脂多糖受体抗体（CDl4-F1TC）、T细胞亚群抗体（CD3-FITC、CD4-PE-Cy5、CD8-PE-Cy7）、同型对照抗体均购于美国BD公司；Centrifuge 5810R台式高速离心机购于德国Eppendorf公司；BD FACSCanto流式细胞仪购于美国BD公司；64排螺旋CT为检测仪器，购自荷兰Philips公司。
1.3.2密度梯度离心法别离PBMC 抽取患者及健康志愿者外周静脉血10 ml置于EDTA抗凝管，2 h内18℃ 2000 r/min（离心半径9.5 cm）离心8 min。取血细胞加PBS稀释至18 ml，分两支管，每只管加4.5 ml Ficoll，将稀释的血细胞缓慢加到Ficol液面上方，18℃ 2000 r/min（离心半径9.5 cm）离心20 min（升速为5，降速为0）。汲取100 ml细胞悬液于流式管中，参加单克隆荧光抗CD33-PE-Cy5 5 μl、CD11b/Ma-1-PE-Cy7 5 μl、HLA-DR-APC 20 μl、CDl4-FITC 20 μl，同型对看管中参加同型对照抗体防止非特异性染色。轻弹流式管管底，混匀细胞与抗体，置于冰上避光温育30 min后，加PBS洗刷细胞2次，1500 r/min（离心半径9.5 cm）离心6 min。弃上清液，加300 μl PBS重悬细胞，再用流式细胞仪检测MDSC在单个核细胞中的表达频率[7]。
1.3.3乙肝病毒（HBV）、肝功能、肿瘤相关查看 乙肝五项定量选用上海实业科华生物技术有限公司试剂盒惯例酶联免疫办法检测。HBV-DNA检测选用荧光定量PCR法，试剂盒购自罗氏公司，检测灵敏度为>500 IU/L。肝功能（ALT、AST、ALP、GGT等）选用HIiTACHI7600主动生化仪，AFP选用化学发光法检测，正常值<10 mg/L。
1.4统计学办法
选用SPSS 21.0统计学软件对数据进行剖析，计量材料以均数±标准差（x±s）表明，计数材料以率或许构成比表明，两组间比较选用独立样本χ2查验，查验水准用α=0.05，以P<0.05为差异有统计学含义。
2成果
2.1患者基线材料的剖析
入组患者的基线状况统计材料见表1，患者Child-Pugh B期占55.70%；具有乙肝感染史、肝癌宗族史占54.85%，肝硬化代偿期占72.99%，无血清学转换为77.63%。
表1 121例肝癌经TACE医治的原发性患者基线材料
2.2肝衰竭发作与PLC患者MDSC表达剖析
PLC患者肝衰竭组的MDSC-m表型显着高于非肝衰竭组，差异有统计学含义（P=0.0405）。肝衰竭组的MDSC-G表型明顯高于非肝衰竭组，差异有统计学含义（P=0.0344）（表2）。
表2 肝衰竭发作与PLC患者MDSC表达剖析[%（95%CI）]
与肝衰竭组比较，*P<0.05
2.3肝衰竭程度与PLC患者MDSC表达剖析
肝衰竭重度组的MDSC-m率显着高于轻度组，差异有统计学含义（P<0.001）。重度肝衰竭组的MDSC-G表型显着高于轻度组，差异有统计学含义（P<0.001）（表3）。
表3 肝衰竭程度与PLC患者MDSC剖析[%（95%CI）]
与轻度组比较，*P<0.05
2.4肝衰竭预后与PLC患者MDSC表达剖析
肝衰竭逝世组的MDSC-m水平显着高于肝衰竭好转组，差异有统计学含义（P<0.01）。逝世组的MDSC-G率显着高于好转组，差异有统计学含义（P<0.01）（表4）。
表4 肝衰竭预后与PLC患者MDSC表达剖析[%（95%CI）]
与好转组比较，*P<0.05
3评论
研讨显现，癌安排95%～99%的血液供给来自肝动脉，TACE能挑选性堵塞肝癌的动脉供血，癌安排部分抗癌药物继续高浓度的开释，使肿瘤缺血坏死，体积缩小[8]。肝细胞癌（HCC）患者在施行外科手术、RFA及TACE等医治后常呈现HBV激活，并由此引起肝功反常[9]，严峻者呈现肝衰竭，并可增高HCC复发率，影响患者预后[10]。MDSC作为骨髓中干细胞发育为单核细胞、淋巴细胞的前体细胞，在恶性肿瘤、炎性反应介导的疾病中与病况开展有关[11]，MDSC水平与肝损害相关的目标（包含ALT、清蛋白、TBil、PTA、INR）有着显着的相关性[12]，提示MDSC与乙型肝炎、乙型肝炎相关性慢加急性肝衰竭（HBV-ACLF）患者的病况严峻程度密切相关[13]。本课题为证明肝癌后肝衰竭的要素与髓性免疫按捺细胞的表达联系，顺次依照肝癌TACE术后是否发作肝衰竭分组，成果显现肝衰竭组的MDSC-m表型显着高于未发作肝衰竭组，估测肝癌术后肝衰竭的发作是因为TACE术后HBV再激活，引起MDSC反常表达。2463例患者的大样本研讨提示，手术医治关于低病毒载量（HBV DNA<2000 IU/ml）HCC患者也可导致HBV的再激活[14]，术后1年HBV再激活率为19.1%，呈现HBV再激活后肝衰竭发作率显着高于非激活者，并降低了3年无病生存率及累积生存率[15]。
HBV-ACLF是我国临床最常见的肝衰竭类型，国内报导其占一切肝衰竭82.8%[16]。HBV-ACLF临床救治困难，病死率为60%～80%。ACLF发病机制极端杂乱，其病况开展与固有免疫和适应性免疫系统调理反常均有关[17]，多种免疫细胞如T淋巴细胞、单核细胞、DC、Th17细胞、Treg均被以为在HBV-ACLF的发作、开展中起到了重要的效果[18]。本研讨调查慢加急肝衰竭重度组与轻度组比较发现，重度肝衰竭组的MDSC率显着升高，重度肝衰竭组的MDSC-G表型显着高于MDSC-m，进一步估测MDSC可能参加免疫调理影响肝衰竭发作进程。
本研讨关于预后的调查发现，肝衰竭组逝世组的MDSC水平显着升高，肝衰竭组的MDSC-G率显着高于好转病例，提示患者病况加剧，短期病死率都与免疫按捺的发作密切联系。对HBV-ACLF组患者进行短期随访调查后发现，外周血MDSC频率与患者4周的病死率有关，可作为猜测该类患者短期病死率潜在的目标[19]。近年来有拉米夫定医治小样本HBV-ACLF患者改进预后的报导，但仍缺少满足的循证医学依据[20]。
由本研讨估测，MDSC可能经过HBV再激活进程参加肝癌术后肝衰竭的发作，因而经过抗病毒医治，防止HBV病毒激活，下调MDSC水平有可能是极为有用的防备肝衰竭发作的手法，相关机制将在进一步研讨中论述。
[参考文献]
[1]Mark WR，Cathal H，Cliona OF，et al.Liver immunology and its role in inflammation and homeostasis[J].Cell Mol Immunol，2016，13（3）：267-276.
[2]Pan CQ，Duan Z，Dai E.Tenofovir to prevent hepatitis B transmission in mothers with high viral load[J].N Engl J Med， 2016， 374（24）：2324-2334.
[3]国家卫生和计划生育委员会.原发性肝癌医治标准（2017年版）[J].临床肝胆病杂志，2017，33（8）：1419-1431.
[4]Vinit K，Sima P，Evgenii T，et al.The nature of myeloid-derived suppressor cell in the tumor microen-vironment[J].Trends Immunol，2016，37（3）：208-220.
[5]汪增秀，谭善忠，孙薇薇，等.外周血T淋巴细胞对乙肝病毒相关慢加急性肝衰竭患者预后的影响[J].安徽医药，2017， 21（12）：2173-2176.
[6]朱雪莲，邓小燕，吴晓蔓，等.髓系来历性按捺细胞在HBV感染相关性肝癌中的表达及含义[J].有用医学杂志，2017， 33（13）：2226-2228.
[7]Chen LY，Yang B，Zhou L.Promotion of mitochondrial energy metabolism during hepatocyte apoptosis in a rat model of acute liver failure[J].Mol Med Rep，2015，2（4）：5035-5041.
[8]Zheng SJ，Qu F，Li JF.Serum sphingomyelin has potential to reflect hepatic injury in chronic hepatitis B virus infection[J].Int J Infect Dis，2015，2015：149-155.
[9]姜楓，杨大明，徐克成.乙型肝炎病毒相关性肝细胞癌抗病毒医治的研讨开展[J].世界消化病杂志，2015，35（1）：12-16.
[10]Atsushi H，Daiju S，Fumie I.Invariant NKT cells are resistant to circulating CD15+ myeloid-derived suppressor cells in patients with head and neck cancer[J].Cancer Sci，2016， 107（3）：207-216.
[11]Dufait I，Van Valckenborgh E，Menu E，et al.Signal transducer and activator of transcription 3 in myeloid-dirived suppressor cell：an opportunity for cancer therapy[J].Oncotarget，2016，7（27）：42698-42715.
[12]Tuettenberg A，Steinbrink K，Schuppan D.Myeloid cells as orchestrators of the tumor microen vironment：novel targets for nanoparticular cancer therapy[J].Nanomedicine （Lond.），2016，11（20）：2735-2751.
[13]揭方荣，鲁晓擘.HBV相关慢加急性肝衰竭的细胞分子免疫机制研讨开展[J].传患病信息，2017，30（2）：114-117.
[14]Yang F，Wei Y，Cai Z，et al.Activated cytotoxic lymphocytes promote tumor progression by increasing the ability of 3 tumor cells to mediate MDSC chemoattraction via Fas singnaling[J].Cell Mol Immunol，2015，12（1）：66-76.
[15]张巍，闫丹丹，高莉，等.嵌合抗原受体T细胞医治原发性肿瘤的优势与研讨开展[J].天津医药，2016，44（2）：253-255.
[16]安晓刚，张旭，马玉，等.血清甲胎蛋白对HBV相关慢加急性肝衰竭患者的预后剖析[J].宁夏医学杂志，2017，39（10）：900-901.
[17]Wang T，Liu M，Zheng SJ，et al.Tumor-associated autoantiboduies are useful biomarkers in immuno-diagnosis of fetoprotein-negative hepatocellular carcinoma[J].World J Gastroenterol，2017，23（19）：3496-3504.
[18]孟雪飞，李红兵.髓源按捺细胞对缓慢丙型肝炎患者干扰素联合利巴韦林抗病毒医治临床预后的影响[J].胃肠病学和肝病学杂志，2017，26（3）：307-310.
[19]龚学艳，胡泰洪，关文锋，等.免疫调理医治在慢加急性肝衰竭前期患者中使用的临床研讨[J].我国中西医结合消化杂志，2017，25（5）：372-375.
[20]Li JF，Zheng SJ，Wang LL，et al.Glucosylceramide synthase regulates the proliferation and apoptosis of liver cells in vitro by Bcl2/Bax pathway[J].Mol Med Rep，2017，16（5）：7355-7360.
（收稿日期：2017-10-27 本文修改：祁海文）
根据您访问的内容，您可能还对以下内容感兴趣，希望对您有帮助：