李玲 姜燕 陈乃江
[摘要] 意图 树立测定保泰松片有关物质的高效液相色谱法。 办法 选用Phenomenex Luna C18（250mm×4.6mm，5μm）色谱柱，活动相为乙腈-水（磷酸调pH至3.0）（50∶50），检测波长为239nm，流速1.0mL/min，柱温为30℃，进样体积为10μL。 成果 在选定的色谱条件下，主成分能与杂质峰之间别离度杰出；办法的检测限为0.2μg/mL；供试品溶液在8h内安稳性杰出。 定论 本办法简略，精确，重现性好，可用于保泰松片的有关物质查看。
[关键词] 高效液相色谱法；保泰松片；有关物质；强制降解实验
[中图分类号] R927.2 [文献标识码] A [文章编号] 2095-0616（2015）19-72-03
[Abstract] Objective To establish a HPLC method for the determination of related substances of phenylbutazone tablets. Methods A Phenomenex LunaC18 column（250mm×4.6mm，5μm） was used， and the mobile phase was acetonitrile–water[adjusting pH to 3.0 with phosphoric acid] （50：50）.The flow rate was 1.0 mL/min and the detection wavelength was set at 239nm.The column temperature was set at 30℃ and the injection volume was 10 μL. Results Related substances were completely separated from the main constituent.The limit of detection was 0.2μg/mL.The sample solution was stable within 8h.Conclusion The method wsa simple，accurate with good reproducibility，and can be used in the determination of related substances of phenylbutazone tablets.
[Key words] HPLC；Phenylbutazone tablets；Related substances；Stressing test
保泰松片为非甾体类抗炎镇痛药，用于医治类风湿性关节炎、风湿性关节炎及痛风。保泰松片的质量规范收载于卫生部药品规范二部第5册[1]，但现有质量规范中未收载其有关物质查看项，本研讨查阅相关文献[2-6]，发现目前国内还没有文献报导保泰松片的有关物质。保泰松片在出产过程中或许会引进工艺杂质，也或许会发生降解产品[7]，并且本品不良反应发生率较高[8-11]，为了更好地操控本品的质量，咱们选用高效液相色谱法对保泰松片中的工艺杂质及或许降解杂质进行了测定和办法学调查，并对收集到的2个厂家的4批样品进行了查验，成果标明该办法专特点强，操作简洁，成果精确牢靠。
1 仪器与试药
Waters 2695 高效液相色谱仪、Waters 2996 DAD检测器，Empower色谱工作站，Sartorius BP-211D电子天平，PHS-3C型酸度计，BRANSON B5500S-MT型超声仪。
对照品保泰松（批号100481-200601，含量99.9%）购自我国食品药品查验研讨院；保泰松片（A厂家，国药准字H41024168，批号13082702，14043001，15012101；B厂家，国药准字H41025373，批号20141001），规范均为0.1g；乙腈、甲醇为色谱纯，磷酸为剖析纯，水为超纯水。
2 办法与成果
2.1 色谱条件与体系适用性
选用Phenomenex Luna C18（250mm×4.6mm，5μm）色谱柱；活动相为乙腈-水（磷酸调pH至3.0）（50∶50）；流速为1.0mL/min；检测波长为239nm；柱温为30℃；进样量为10μL。理论板数按保泰松峰核算不低于4000，保泰松与相邻杂质峰的别离度应符合要求。
2.2 溶液的制备
取本品20片，除掉包衣后，精细称定，研细，精细称取适量（约适当于保泰松50mg），置25mL量瓶中，加甲醇约20mL，超声处理30min，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀滤过，取续滤液作为供试品溶液；精细量取供试品溶液适量，用甲醇定量稀释制成每1mL约含保泰松20μg的溶液，作为对照溶液。
精细称取保泰松对照品10.0mg，置100mL量瓶中，加甲醇超声使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。
3 办法
3.1 强制降解实验
取A企业样品（批号：13082702）进行高温、水浴、光照、酸、碱和氧化损坏的强制降解实验[12-15]。
3.1.1 高温损坏 取本品细粉适量，105℃放置2h，精细称取适量（约适当于保泰松50 mg），置25mL量瓶中，照“2.3”项下制造供试品溶液。
3.1.2 水浴损坏 精细称取本品细粉适量（约适当于保泰松50mg），置25mL量瓶中，加甲醇约20mL，超声处理30min，水浴温度加热3h，放冷，用甲醇稀释定容，摇匀滤过，取续滤液。
3.1.3 光照损坏 取本品供试品溶液置4500 lx日光灯下，照耀24h。endprint
3.1.4 酸损坏 精细称取本品细粉适量（约适当于保泰松50mg），置25mL量瓶中，加甲醇约10mL，超声处理30min，再加1mol/L盐酸溶液2mL，放置6h，加1mol/L氢氧化钠溶液2 mL中和，用甲醇稀释定容，摇匀滤过，取续滤液。
3.1.5 碱损坏 精细称取本品细粉适量（约适当于保泰松50mg），置25mL量瓶中，加甲醇约10mL，超声处理30min，再加1mol/L氢氧化钠溶液2mL，放置7h，加1mol/L盐酸溶液2mL中和，用甲醇稀释定容，摇匀滤过，取续滤液。
3.1.6 氧化损坏 精细称取本品细粉适量（约适当于保泰松50mg），置25mL量瓶中，加甲醇约10mL，超声处理30min，再加30%过氧化氢溶液2mL，放置5h，用甲醇稀释定容，摇匀滤过，取续滤液。
3.1.7 辅料搅扰实验 取不含保泰松的空白辅料适量，制成空白辅料溶液。
3.1.8 强制降解实验成果 按“2.1”项下色谱条件测定上述溶液，记载色谱图，见图1，实验成果标明：各降解产品峰与保泰松主峰彻底别离，辅料无搅扰。阐明本法专特点强，适用于保泰松片有关物质的测定。
3.2 检测限和定量限
精细吸取保泰松对照品溶液适量，加甲醇逐渐稀释至色谱图中保泰松峰高别离为噪音的3倍和10倍，测得保泰松的检测限和定量限别离为0.2μg/mL和0.5μg/mL。
3.3 精细度实验
取样品测定项下的对照溶液，照“2.1”项下的色谱条件，接连进样测定6次，保泰松峰面积的RSD为0.7%。成果标明仪器精细度符合要求。
3.4 安稳性实验
取样品测定项下的供试品溶液在0、2、4、8h别离测定保泰松与各杂质的峰面积。成果单个最大不知道杂质均为0.09%，杂质总量均为0.22%，阐明溶液在8h内安稳。
3.5 样品有关物质检测
依据供试品溶液中的有关物质含量和强制降解实验条件下的杂质降解状况，拟定保泰松片的有关物质极限。供试品溶液色谱图中如有杂质峰，单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积的0.5倍（0.5%），各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积（1.0%）。成果批号别离为13082702、14043001、15012101、20141001的样品中单个最大不知道单杂别离为0.09%、0.09%、0.05%、0.07%，杂质总量别离为0.22%、0.19%、0.18%、0.15%。
4 评论
4.1 活动相的挑选
调查缓冲液-乙腈、水-甲醇体系在不同pH条件下对峰型的影响，对杂质与主峰的别离及杂质之间的别离状况的影响。发现在pH3.0条件下，杂质均能彻底别离；杂质在乙腈体系下，杂质的别离状况优于甲醇体系；在水体系与缓冲液体系下，杂质别离状况根本适当。考虑活动相操作简洁，且对色谱柱危害最小准则，挑选乙腈-水（pH 3.0）作为活动相。
4.2 检测波长的断定
本研讨经过DAD检测器进行光谱扫描，成果显现保泰松的最大吸收波长为239nm，按规则储存的样品杂质和强制降解实验条件下的降解杂质的最大吸收波长均在236～239nm之间；可见各种杂质的最大吸收波长均十分挨近保泰松的最大吸收波长，所以实验挑选在保泰松的最大吸收波长239nm下测定有关物质。
4.3 杂质谱剖析
不同条件下的降解实验标明，保泰松片在碱性条件下较安稳，在光照、氧化条件下略有降解，在酸、高温、水浴条件下降解严峻；各个降解实验条件下的降解杂质为光照（RRT=0.52）、氧化（RRT=0.52、1.47）、酸（RRT=0.60、1.47）、高温（RRT=0.52）、水浴（RRT=0.52）；供试品溶液放置48h，有细微降解，降解杂质为RRT=0.52、1.47，而在两个厂家4批供试品溶液中单个最大不知道杂质均为RRT=0.52，该杂质在光照、氧化、高温、水浴条件下均有降解，要进一步承认首要降解产品的结构，使用LC-TOF-MS，LC-MS-MS联用技能剖析。
本研讨选用的高效液相色谱法可以较精确地测定保泰松片中的有关物质，各杂质峰均能有用别离，办法专特点强，灵敏度高，操作简洁，办法牢靠。
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（收稿日期：2015-06-18）endprint
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