李玲??陈乃江??姜燕
[摘要] 意图 树立保泰松片含量测定的HPLC办法。 办法 选用Phenomenex Luna C18（250 mm × 4.6 mm，5μm）色谱柱，活动相为乙腈-水（磷酸调pH至3.0）（70︰30），流速1.0mL/min，检测波长为239nm，柱温为室温，进样体积为10μL。成果 保泰松在9.65～96.50μg/mL范围内线性关系杰出（r=0.9999），均匀回收率为99.6%，RSD为0.7%（n=9），保泰松检测限为2ng。 定论 该办法操作简洁、精确、灵敏度高、重复性好，可用于保泰松片的含量测定。
[关键词] 高效液相色谱法；保泰松片；含量测定；办法验证
[中图分类号] R927.2 [文献标识码] A [文章编号] 2095-0616（2015）17-61-03
HPLC method for content determination of phenylbutazone tablets
LI Ling CHEN Naijiang JIANG Yan
Lianyungang Institute for Drug Control， Lianyungang 222006， China
[Abstract] Objective To develop a method for the determination of phenylbutazone tablets by HPLC. Methods A Phenomenex Luna C18 column（250mm×4.6mm，5μm） was used， and the mobile phase was acetonitrile –water[adjusting pH to 3.0 with phosphoric acid] （70∶30）. The flow rate was 1.0mL/min and the detection wavelength was set at 239nm. The injection volume was 10μL. Results The linear range of phenylbutazone was 9.65-96.50μg/mL （r=0.9999）， the average recovery was 99. 6% and RSD was 0.7%（n=9）， the limit of detection was 2ng. Conclusion The method is simple， accurate with promising sensitivity and reproducibility， and can be used in the determination of phenylbutazone tablets.
[Key words] HPLC； Phenylbutazone tablets； Determination； Method verification
保泰松片为非甾体类抗炎镇痛药，用于医治类风湿性关节炎、风湿性关节炎及痛风。本品不良反应发生率较高[1-4]，因而有必要树立一种精确、有用、便利的含量测定办法。保泰松片的质量规范收载于卫生部药品规范二部第5册[5]，原规范中保泰松片的含量测定选用容量剖析法。笔者查阅相关文献[6]，有HPLC法测定保泰松片的含量，选用磷酸二氢钾溶液作为缓冲盐，活动相制造杂乱，且对色谱柱有危害，会大大缩短色谱柱的运用寿数。本文挑选乙腈-水体系作为活动相，树立了高效液相色谱法测定保泰松片的含量，此法防止了运用缓冲盐对色谱柱寿数的影响，且办法简略、专特点强、精细度高、重现性好。
1 仪器与试药
1.1 仪器
Waters 2695 高效液相色谱仪、Waters 2996 DAD检测器，Empower 色谱工作站，Sartorius BP-211D 电子天平，PHS-3C型酸度计（上海精细科学仪器有限公司），BRANSON B5500S-MT型超声仪。
1.2 试药
对照品保泰松（批号100481-200601，含量99.9%）购自我国食品药品检定研讨院；保泰松片[上海现代哈森（商丘）药业有限公司，H41024168，规范为0.1 g，批号为13082702，1312280，14043002]；乙腈为色谱纯（德国Merck公司），磷酸为剖析纯（国药集团化学试剂股份有限公司）。
2 办法与成果
2.1 色谱条件与体系适用性
选用Phenomenex Luna C18（250mm ×4.6mm，5μm）色谱柱；活动相为乙腈-水（磷酸调pH至3.0）（70︰30）；流速为1.0mL/min；检测波长为239nm；柱温为室温；进样量为10μL。理论板数按保泰松峰核算不低于4000。
2.2 对照品溶液制备
精细称取保泰松对照品96.60mg，置100mL量瓶中，加甲醇超声使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品储藏液。
精细量取对照品储藏液5mL置100mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，作为对照品溶液。
2.3 供试品溶液制备
取样品（批号13082702）20片，除掉包衣后，精细称定，研细，精细称取适量（约相当于保泰松50mg），置100mL量瓶中，加甲醇约70mL，超声处理20min，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀；滤过，精细量取续滤液5mL，置50mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
2.4 阴性样品溶液的制备
取不含保泰松的空白辅料适量，按供试品溶液制备办法制成阴性样品溶液。
2.5 专特点调查
别离取对照品溶液，供试品溶液，阴性样品溶液各10μL，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，记载色谱图，成果见图1。从色谱图可见，其他成分对保泰松的测定无搅扰，保泰松的保存时刻约为7.4 min。标明该办法专特点杰出。
图1 对照品溶液（A）、样品溶液（B）及阴性溶液（C）的液相色谱图
2.6 线性关系调查
精细量取“2.2”项下的对照品贮备液1.0、2.0、4.0、5.0、6.0、8.0、10.0mL，别离置100mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，各精细汲取10μL注入液相色谱仪，记载峰面积，以峰面积（Y）为纵坐标，以对照品质量浓度（X，μg/mL）为横坐标，制备规范曲线，得回归方程：Y=29506X+21093，r=0.9999。标明保泰松在9.65～96.50 μg/mL范围内呈杰出线性关系。
2.7 稳定性调查
取同一份供试品溶液（批号13082702），别离于0、2、4、6、8、12、16 h进样，记载色谱图。成果保泰松峰面积RSD=0.5%，标明样品在16h内稳定性杰出。
2.8 精细度调查
取同一份供试品溶液（批号13082702），接连进样6次，测定保泰松峰面积。成果RSD=0.5%，标明仪器精细度杰出。
2.9 重复性调查
取同一批样品（批号13082702）6份，按“2.3”项下办法平行制备成供试品溶液，别离进样。成果RSD=0.7%，标明办法的重复性杰出。
2.10 加样回收率实验
取9份已测知含量的样品（批号13082702）细粉，精细称取适量（约相当于保泰松5mg），别离置20mL量瓶中，均匀分红3组，别离精细参加对照品储藏液4、5、6mL，加甲醇适量，超声处理20min，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀；滤过，精细量取续滤液5mL，置50mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。精细汲取10μL，注入液相色谱仪，核算加样回收率。成果本品低、中、高3个浓度的均匀回收率（n=9）为99.6%，RSD=0.7%。阐明本办法精确度好。加样回收率实验成果见表1。
表1 加样回收率实验成果（n=9）
样品含量
（mg） 参加量
（mg） 测得量
（mg） 回收率
（%） 均匀回收率
（%） RSD
（%）
4.883 3.864 8.701 98.81 99.6 0.7
4.870 3.864 8.723 99.72
4.888 3.864 8.707 98.84
4.918 4.830 9.758 100.21
4.901 4.830 9.717 99.71
4.883 4.830 9.743 100.62
4.853 5.796 10.642 99.88
4.879 5.796 10.631 99.24
4.892 5.796 10.658 99.48
2.11 检测限和定量限
精细汲取保泰松对照品溶液适量，加甲醇逐渐稀释至色谱图中保泰松峰高别离为噪音的3倍和10倍，测得保泰松的检测限和定量限别离为2ng和5ng。
2.12 样品含量测定
取3批供试品，按“2.3”项下的办法制备供试品溶液，精细量取10μL，按外标法核算含量，3批样品含量别离为97.1%，96.4%，98.6%。
3 评论
3.1 检测波长的挑选
保泰松为吡唑烷二酮类化合物，在不同pH溶液中出现不同的光谱吸收，在本文的偏酸性活动相色谱条件下，经DAD检测器在190～400nm的波长范围内进行扫描，发现保泰松在239 nm 波利益有最大吸收，因而挑选239nm作为检测波长。
3.2 活动相的挑选
参阅有关文献资料[6-15]及相关书本[16-18]，考虑活动相操作简略便利，且对色谱柱危害最小准则，别离调查了甲醇-水、乙腈-水体系在不同pH条件下对峰型的影响，成果发现乙腈-水体系优于甲醇-水体系；实验中以磷酸调节水pH别离为3.0、4.0、5.0、6.0、7.0时对峰形的影响，成果标明当乙腈-水（pH 3.0）为70︰30时峰型最好，且基线平稳，出峰时刻适中。
3.3 提取条件的挑选
保泰松溶于乙醇或乙醚，几乎不溶于水，考虑有机溶剂的性质，挑选甲醇作为提取溶剂；一起调查超声时刻对提取作用的影响，发现超声20min即能使有用成分溶出。故以此为提取条件。
3.4 耐用性实验
改动色谱条件：乙腈初始浓度（±5%），活动相pH（±0.5），柱温（±5℃），流速（±0.1mL/min），依据主峰理论板数和拖尾因子进行调查实验条件的耐用性。经实验，以上变化均能满足本实验体系适用性要求，标明该办法耐用性杰出。
本研讨树立HPLC法测定保泰松片的含量，具有操作简洁，专特点强，成果精确，重复性好的长处，能够防止容量剖析法的固有缺陷，可作为保泰松片的定量剖析办法。
[参阅文献]
[1] 朱学义，董乐，李泽纯.保泰松合用地塞米松致药物剥脱性皮炎并药物性肝炎1例[J].我国药业，2013，22（13） ：77.
[2] 但蓓蓓.保泰松急性中毒患儿1例救治报导[J].儿科药学杂志，2012，18（3）：1.
[3] 肖曙芳，李亚玲，陈祝，等.保泰松中毒致多器官功能障碍1例[J].儿科药学杂志，2006，12（6）：62.
[4] 王蕊婷，卢亚弟，尉亚娥.保泰松引起频发多源性室性期前缩短一例[J].山西医药杂志，2002，4（2）：156.
[5] 中华公民共和国卫生部药典委员会.卫生部药品规范（二部）[S].第五册.1996：65.
[6] 孙旌文，马洪涛.高效液相色谱法测定保泰松片的含量[J].西北药学杂志，2010，25（5）：332-333.
[7] 张磊，白青山，王亮.复方颠茄口服溶液中硫酸阿托品含量测定及质量规范研讨[J].药物剖析杂志，2013，33（8） ：1407-1410.
[8] 穆同娜，王浩，刘艳琴，等.高效液相色谱法测定化妆品中的保泰松[J].日用化学工业，2011，41（6） ：459-461.
[9] 车洪勇，杨元玉，冯爱萍.HPLC法测定关节镇痛片中保泰松和马来酸氯苯那敏的含量[J].我国药事，2003，17（3）：167-168.
[10] 杜兴.HPLC法测定风湿松片中保泰松及氨基比林的含量[J].西北药学杂志，1999，14（2）：53.
[11] 姜泽慧，吴勇.市售保泰松片溶出度办法的调查[J].我国药师，2014，17（6）：962-964.
[12] 郭旭光，郑子栋.多索茶碱注射液的含量测定办法改善[J].我国药事，2014，28（7）：774-777.
[13] 黎昌权，熊雪庆.HPLC法测定尼美舒利颗粒的含量[J].我国药师，2014，17（9）：1590-1594.
[14] 闫年光光阴.HPLC法测定维生素B1片的含量及含量均匀度[J].数理医药学杂杂志，2013，26（6）：729-730.
[15] 刘瑛，陈运峰.高效液相色谱法测定土霉素片的含量[J].我国药事，2004，18（5）：300-301.
[16] 孙毓庆.剖析化学下册[M].北京：公民卫生出版社，2000：297-301.
[17] 孙毓庆.现代色谱法及其在药物剖析中的使用[M].北京：科学出版社，2005：235-236.
[18] 刘文英.药物剖析[M].北京：公民卫生出版社，2004：381-382.
（收稿日期：2015-06-03）
根据您访问的内容，您可能还对以下内容感兴趣，希望对您有帮助：