唐斌+黄丹+傅强
[摘要] 意图 剖析SLCO1B1的首要骤变388G>A和521T>C在南昌区域汉族原发性高脂血症人群中的散布。 办法 别离选用PCR-RFLP和ARMS-PCR办法对280名寓居于南昌区域汉族原发性高脂血症患者SLCO1B1的388G>A和521T>C位点进行基因分型，并对其进行Hardy-Weinberg平衡查验。 成果 280名受试者中，SLCO1B1的388G>A位点：110名为388G>A骤变杂合子，141名为388G骤变纯合子，别离占总人数的39.3%和50.3%，余29名为388A野生型纯合子，占总人数的10.4%，骤变等位基因的发作频率为70.0%。521T>C位点：60名为521T>C骤变型杂合子，6名为521C骤变型纯合子，别离占总人数的21.4%和2.1%，余214名为521T野生型纯合子，占总人数的76.5%，骤变等位基因的发作频率为12.9%。 定论 南昌区域汉族原发性高脂血症人群中的SLCO1B1 388G>A和521T>C骤变与日本及我国汉族男性健康人群散布类似，388G>A骤变率显着高于白人，521T>C骤变率显着高于黑人。
[关键词] SLCO1B1；基因型；原发性高脂血症
[中图分类号] R394 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701（2014）34-0001-03
有机阴离子转运多肽OATP1B1是一种表达在窦状隙基底侧细胞膜上的摄入型转运体，为具有基因多态性的跨膜转运蛋白[1，2] ，由SLCO1B1基因编码，它首要散布于人的肝脏，其他还可见于肾脏、脑、小肠等器官，具有介导肝细胞膜转运内、外源性物质并对其进行代谢和消除的生理功用。转运物质包含他汀类、降糖药、利福平、血管严重素Ⅱ 受体拮抗剂和胆汁酸、非结合型胆红素、甲状腺素、PGE和某些肽类[3]，Hirouchi M[4]等和Chung JY等[5]研讨发现，SLCO1B1多态性在OATP1B1的转运功用和药代动力学个别差异上起着重要效果。日本研讨者报导，388G>A和521T>C是其人群中常见基因骤变，频率别离为66%和15.8%[6]。但是关于南昌区域原发性高脂血症人群中的状况别离未见报导，本文拟对此作一研讨，以期为原发性高脂血症患者药效和药动学的个别差异供给根据。
1 目标与办法
1.1 研讨目标
参阅《血脂反常防治主张》从江西省人民医院2013 年7～12月门诊就诊患者中挑选280名寓居于南昌区域汉族无血源联系原发性高脂血症患者，男132例，女148例，年纪33～70 （55.8±9.2）岁；身高144～184（163.6±8.6）cm；体重40～90（66.6±10.5）kg。
1.2 办法
1.2.1 资料 引物：南昌长城生物科技有限公司组成；DNA 提取试剂：美国Pel-Freez 公司；LA Taq DNA 聚合酶，Taq DNA 聚合酶，限制性内切酶TaqI及dNTP （MBI Fermentas，Lithuania）：深圳晶美生物工程有限公司。
1.2.2 DNA抽提 采纳受试者清晨空腹外周EDTA抗凝静脉血5 mL，以DNA提取试剂盒提取外周血DNA。
1.2.3 基因分型 参阅基因分型优化文献[7]。
1.2.3.1 388G>A分型：选用PCR-RFLP进行：其引物为：F：5-ATAATGGTGCAAATAAAGGGG-3，R：5-ACTATCTCAGGTGATGCTCTA-3。反响系统（25 μL）：10×PCR Master Mix 2.5 μL，DNA模板约200 ng，前后引物各40 pmol/L，Taq酶2.0 U，0.4 mmol/L dNTP，余额体积弥补纯水完结。PCR反响条件：94℃ 5 min，94℃30 s，44℃ 30 s，72℃ 30 s，38个循环，72℃ 7 min。388G>A 位点PCR扩增产品2.5%的琼脂糖凝胶对酶切产品进行电泳分型。扩增产品酶切反响系统：10 μLPCR扩增产品，1 μL的Taq I 酶，1 μL 10×H Master Mix，3 μL纯水，65℃温育4 h。2.5%的琼脂糖凝胶对酶切产品进行电泳分型。
1.2.3.2 521T>C 分型：以ARMS-PCR办法进行分型。引物：OuterP1：5-AAGTAGTTAAATTTGTAATAGAAATGC-3，InnerP1：5-GGGTCATACATGTGGATATAAGT-3，InnerP2：5-AAGCATATTACCCATGAACG-3，OuterP2：-GTAGACAAAGGGAAAGTGATCATA-3，反响系统（25 μL）：10×PCR Master Mix 2.5μL，Taq酶2U，dNTP 0.4 mmol/L，hDNA模板200 ng，各引物均为40 pmol/L，余额取纯水补足。PCR反响条件：94℃ 5 min，94℃ 30 s，48℃ 30 s，72℃ 30 s，38个循环，72℃ 5 min。2.5%的琼脂糖凝胶对酶切产品进行电泳分型。
1.3 统计学剖析
选用SPSS 12.0软件包进行数据剖析。运用频率计数法核算基因型频率及等位基因频率，两组间比较选用卡方查验基因型是否契合Hardy-Weinberg平衡。P<0.05标明差异具有统计学含义。
2 成果
2.1 基因型的断定
388G>A基因：如图1： 2.5%的琼脂糖凝胶电泳摄影图所示：骤变型杂合子：23bp、63bp、123bp与151bp等4处显现亮带；骤变型纯合子：23bp 、63bp及128bp等3处显现亮带，野生型纯合子：63bp和151bp 2处显现亮带。521T>C基因：如图2：2.5%的琼脂糖凝胶电泳摄影图所显：骤变型杂合：123bp、179bp与260bp等3处显现亮带；骤变型纯合子：123bp 和260bp 2处显现亮带；野生型纯合子：179bp和 260bp 2处显现亮带。
2.2 基因型散布及等位基因频率散布
基因型和各等位基因的频率如表1。280名南昌区域汉族原发性高脂血症患者中，388G>A：检测出29例受试者为野生型纯合子，占总人数的10.4%；骤变纯合子141例，占比为50.3%；其他110例是份额为39.3%的骤变杂合子，等位基因骤变发作率为70.0%。521T>C：检测出214例野生型纯合子，占总人数的76.5%；6例骤变型纯合子，占2.1%，余60例骤变型杂合子，占总人数的21.4%，等位基因骤变发作率为12.9%。两基因调查值契合Hardy-weinberg 遗传平衡。标明本研讨资料具有集体代表性（P=0.31和P=0.94）。
3 评论
现在大多研讨证明转运体及药物代谢酶的遗传多态性与药物相互效果的个别差异具有重要的相关性。近年来体内或体外研讨证明摄入型转运蛋白OATP1B1在药物底物的转运代谢起着重要的效果。现在在不同研讨人群中各国研讨者现已发现SLCO 1B1基因（编码OATP1B1蛋白）多达20种基因骤变[7]。当时研讨多会集在常见的两个骤变位点，坐落第5外显子的388A>G与第6外显子的521T>C，上述两个位点的骤变显着影响许多底物的转运活性、转运速度及与底物结合力。
本文将南昌区域汉族原发性高脂血症人群388G>A与521T>C等位基因骤变散布状况与报导的我国汉族男性健康、欧美和日本人群作一比较：本研讨388G>A等位基因骤变频率为70.0%，显着高于白人30%的骤变率（P<0.05），与报导我国汉族男性健康人群（73.4%）、黑人（74%）及日本人群（62.9%）之间无显着差异（P>0.05）。在本研讨中521T>C等位基因骤变率为12.9%，显着高于黑人的2%的骤变率（P<0.05），与报导我国汉族男性健康人群（14.0%）、白人（14%）及日本人群（15.8%）之间无显着差异（P>0.05）[6，8，9]。上述成果标明，在不同人群中388G>A和521T>C骤变率不同种族间具有显着的差异。
现在大都报导显现，SLCO1B1基因多态性显着影响其参加转运药物的药效动力学、药物毒性以及药代动力学[10]。如现在报导的广泛应用于高脂血症医治的HMG-CoA还原酶抑制剂瑞舒伐他汀，其被SLCO1B1转运入肝而行调脂效果，熊玉卿等[11]研讨报导，521T>C 位点骤变影响瑞舒伐他汀药代动力学，使其转运体活性下降，增高血药浓度，可能与骤变后添加瑞舒伐他汀在人体内的吸收程度，减慢消除进程有关。国外日本与德国研讨者别离报导显现，521T>C野生型纯合子组血药浓度显着低于骤变组，而其非肾铲除率显着高于骤变组。而关于388G>A的骤变是否影响药效动力学、药代动力学现在研讨定论不一致。德国研讨者报导，388G>A骤变组普伐他汀血药浓度显着升高，但是较大都体表里试验未见该骤变的上述影响[12，13]。而在关于非结合胆红素水平的研讨中，日本、台湾与我国大陆的研讨者报导SLCO1B1521T>C骤变导致个别血浆浓度显着高于非骤变人群[7，14，15]。以上显现，SLCO1B1基因多态性显着影响某些药物的药代动力学及药物浓度，其研讨关于临床个别化用药具有重要指导含义，如临床医生在运用涉及到该两个骤变基因参加转运与代谢的底物如他汀类，抗结核药及降糖等药物时， 应参阅其基因型检测成果，以期进步药物效果及削减副效果。
综上所述：在南昌区域汉族原发性高脂血症人群中SLCO1B1的388G>A和521T>C骤变比较常见，其骤变率与日本、我国汉族男性健康人附近，与报导的白人和黑人频率有显着差异，提示其骤变率可能与原发性高脂血症发病无关，但可能与种族有关，此种差异可能是遗传要素与环境要素等多要素的相互效果成果，详细机制有待进一步研讨。
[参阅文献]
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（收稿日期：2014-09-24）
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（收稿日期：2014-09-24）
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