吴强 张祥海
[摘要]意图 本研讨旨在评论CDl47和VEGF-C在肺鳞癌、腺癌中的表达水平与临床病理之间的联络以及彼此联系。办法运用免疫组化的办法对57例肺癌安排标本进行CDl47和VEGF-C检测。成果（1）57例肺鳞癌、腺癌中CDl47和VEGF-C的阳性表达率别离为63.16%、66.67%。肺鳞癌组和腺癌组CDl47和VEGF-C表达无差异（P>0.05）。（2）肺鳞癌、腺癌中CDl47和VEGF-C表达与肿瘤淋巴结搬运有关（P<0.05）及肿瘤TNM分期有关（P<0.01），而与患者的年纪、性别、吸烟及肿瘤细胞分解程度无关（P>0.05）。（3）CDl47与VEGF—C的表达呈正相关（x2=12.214，P<0.01）。定论 CD147和VEGF-C在肺鳞癌、腺癌的滋润发展和搬运进程中起重要效果，并且或许发挥协同效果。CD147和VEGF-C可作为判别肺癌患者预后的有用目标。
[关键词]肺肿瘤；免疫组化；CD147；VEGF-C
[中图分类号]R734.2 [文献标识码]B [文章编号]2095-0616（2016）06-156-05
CDl47是一种广泛散布于人体多种安排细胞外表的跨膜糖蛋白，又名为细胞外基质金属酶诱导蛋白（EMMPRN），归于免疫球蛋白宗族（IgSF）成员。它在多种肿瘤细胞中高表达，影响肿瘤中的成纤维细胞排泄基质蛋白酶类（MMPs），参加细胞外基质和基底膜降解，在肿瘤滋润、搬运进程中起重要效果。VEGF-C是VEGF宗族成员，具有影响血管和淋巴管生成的两层效果，VEGF-C的高表达能够促进肿瘤淋巴管的生成及肿瘤细胞向区域淋巴结搬运。本研讨选用免疫安排化学办法，检测57例非小细胞肺癌（NSCLC）安排中CDl47和VEGF-C的表达状况，评论其与肺癌安排的安排学类型、分解程度、临床分期、淋巴结搬运等临床病理特征之间的联系及二者的相关性。
1.材料与办法
1.1病理标本
搜集三峡大学榜首临床医学院（宜昌市中心人民医院）胸心外科2003年7月-2007年4月手术切除且术前未经放化疗的原发性肺鳞癌、腺癌安排标本57例。一切标本均惯例选材，甲醛固定，惯例白腊包埋，厚度5um接连切片。别离做HE和免疫组化染色。
1.2临床与病理材料
本组共57例患者均经临床病理确诊，术前均未经放疗或化疗医治，其中男46例，女11例；年纪28～71岁，均匀57.3岁，鳞癌46例，腺癌11例；手术切除淋巴结病理证明有淋巴结搬运者29例，病理分级：高分解16例，中分解24例，低分解17例。依照世界抗癌联盟（UICC）2002年公布的第6版世界肺癌TNM分期规范进行分期，I（Ia+Ib）期13例，Ⅱ期（Ⅱa+Ⅱb）26例，Ⅲ（Ⅲa+Ⅲb）期13例，Ⅳ期5例，吸烟（吸烟指数>400）34例。
1.3试剂
兔抗人CDl47多克隆抗体，兔抗人VEGF-C多克隆抗体及PV-9000二步法即用型试剂盒均从北京中杉金桥生物技术有限公司购买。
1.4办法
免疫组化染色选用PV-9000二步法，依照阐明书操作进程如下：（1）白腊切片惯例脱蜡、水化。（2）用3%H2O2去离子水孵育10min，阻断内源性过氧化物酶。（3）依据一抗要求用微波加热抗原修正。（4）滴加一抗，湿盒中37℃两小时，PBS冲刷，2min×3次。（5）滴加试剂1，室温孵育20min，PBS冲刷2min×3次。（6）滴加试剂2，室温孵育30min，PBS冲刷2min×3次。（7）用DAB溶液显色。（8）苏木精复染后，脱水，通明，封片。用PBS缓冲液替代一抗作阴性对照，用已知阳性对相片作阳性对照。
1.5CD147和VEGF-C成果断定
CDl47以细胞膜和（或）细胞质呈黄色为阳性，VEGF-C阳性染色首要为细胞质内呈现棕黄色颗粒为阳性。每张切片随机调查5个高倍视界（400倍），每个视界计数100个细胞，核算阳性细胞数。CDl47归纳染色强度和阳性染色细胞占癌细胞总数的份额进行判别。（1）按切片中细胞上色深浅评分：0分细胞无上色；1分为黄色；2分棕黄色；3分为棕褐色。（2）按阳性细胞数占癌细胞总数的份额评分：1分为<25%；2分为≥25%且≤50%；3分为>50%且≤75%；4分为>75%。取（1）、（2）两项的乘积为总积分：0～3分为阴性；>3分且≤6分为（+）；>6分且≤9分为（++）；>9分为（+++）。VEGF-C阳性强度判别规范：癌细胞，脉管内皮细胞质呈棕黄色为染色阳性细胞。肺癌细胞VEGF-C表达强度：按癌细胞免疫组化染色上色深浅计分：0分为无色，1分为淡黄色，2分为棕黄色，3分为棕褐色。按阳性细胞所占百分比打分：阴性为0分、阳性细胞<10%为1分、阳性细胞数11%～50%为2分、阳性细胞数>51%为3分；染色强度与-阳性细胞分比的乘积：0～2分为，3～4分为+、5～7分++、8～9分+++。染色成果有两名病理医生选用双盲法鉴定，（-/+）为低表达，（++/+++）为高表达。
1.6统计学办法
使用SPSS13.0软件进行数据处理，计数材料选用x2查验和相关剖析，并核算Pearson列联络数，P<0.05为差异有统计学含义。
2.成果
2.1CDl47与VEGF-C在肺鳞癌、腺癌中的表达及与病理特征的联系
免疫组化染色CD147首要定坐落肿瘤细胞膜和细胞质内，VEGF-C首要定坐落肿瘤细胞的细胞质，均呈棕黄色或褐色小片状或颗粒状。在本组病例中CDl47与VEGF-C的阳性表达率别离为63.16%（36/57）、66.67%（38/57），CDl47在肺鳞癌、腺癌的阳性率别离为58.70%（27/46）、81.82%（9/11），VEGF-C在肺鳞癌、腺癌的阳性率别离为60.87%（28/46）、90.91%（10/11），二者在肺鳞癌、腺癌中的表达差异均无统计学含义（P>0.05）。在不同的细胞分解程度之间CDl47和VEGF-C的表达差异均无统计学含义（P>0.05）。CDl47和VEGF-C在有淋巴结搬运组的阳性率别离为（24/29）82.76%、82.76%（24/29），显着高于无淋巴结搬运组42.86%（12/28）、50.00%（14/28）（P<0.05）。见表1。
2.2CD147与VEGF-C在肺鳞癌、腺癌中的表达与临床特征的联系
CD147和VEGF-C在肺癌中的阳性表达与患者的年纪、性别及有无吸烟（吸烟指数>400）均无显着地相关性。在I+Ⅱ期组CDl47和VEGF-C的阳性率别离为48.72%（19/39）、53.85%（21/39）；在Ⅲ+Ⅳ期组别离为94.44%（17/18）、94.44%（17/18）。CDl47和VEGF-C在肺鳞癌、腺癌中的表达与肿瘤的临床分期有密切联系（P<0.01）。见表2。
2.3CD147和VEGF-C在肺鳞癌、腺癌中的表达的彼此联系
57例患者中，36例CDl47阳性表达中一起有VEGF-C阳性表达30例；21例CDl47阴性患者中，有8例VEGF-C阳性表达。CDl47与VEGF-C的表达呈正相关（X2=12.214，P<0.01）。见表3。
3.评论
肺癌与其他实体肿瘤相同具有侵袭和远处搬运的生物学特性，而恶性肿瘤细胞的侵袭、搬运是多要素参加的交联式多进程反响的杂乱进程。包含原发肿瘤滋润、基底膜降解、肿瘤细胞进出血管和肿瘤细胞对靶安排侵袭等环节。在这一杂乱的进程中，细胞外基质的降解、肿瘤血管及淋巴管的生成对肿瘤细胞的侵袭搬运起着至关重要的效果。近年来对CDl47与肿瘤的联系研讨发现，CDl47广泛表达于人体多种细胞，在膀胱癌、肺癌、神经胶质瘤、黑色素瘤、淋巴瘤，结直肠癌，子宫内膜癌等多种肿瘤细胞中表达添加。CDl47可调理血管内皮成长因子而对肿瘤的血管生成有促进效果，也能够影响成纤维细胞发生金属基质蛋白酶（MMP2、MMP9等），其经过水解Ⅳ型胶原损坏肿瘤细胞周围的基底膜和调理VEGF而影响肿瘤细胞的成长、滋润和搬运。Zheng等在对胃癌的研讨中发现，CD147表达增强具有促进血管生成及VEGF表达的效果。拂晓等在对膀胱移行细胞癌的研讨中发现，大都患者都存在CD147和VEGF一起表达，且两者呈正相关（r=0.406，P<0.01）。Tang等在共培育的乳腺癌细胞和成纤维细胞中，CD147过表达时VEGF的表达上调；按捺CD147的表达、中和CD147蛋白的活性或按捺MMP的活性，都会使VEGF的表达遭到按捺。Tang等还对VEGF发生进程中或许的信号通路如P13K-Akt、MAPK、JUN、p38激酶进行了研讨。发现在MDA-MB-231乳腺癌细胞系中，过表达的CDl47只能影响Akt和MAPK的磷酸化，而不能影响JUN和p38激酶的磷酸化。而按捺CDl47的表达会按捺Akt和MAPK的磷酸化。这些成果标明在肿瘤细胞和成纤维细胞中，CDl47是经过P13K-Akt途径调理VEGF的表达。
VEGF-C是VEGF宗族成员之一，是特异的促淋巴管内皮成长因子和肿瘤血管生成标志物，在促进肿瘤淋巴管和血管生成以及肿瘤搬运起重要效果。其受体有VEGFR-2（FLK-1）和VGEFR-3（fit-4）。VEGF-C对VEGFR-3（fit-4）有更高的亲和力，与之优先结合，VEGF-C与VEGFR-3结合后经过MEK/ERK和P13K-Akt途径引起淋巴管内皮细胞增生，VEGF-C蛋白水解后的老练方式还可结兼并激活VEGFR-2，效果于血管、淋巴管内皮细胞。近年来许多研讨标明多种人类肿瘤表达VEGF-C，大部分中VEGF-C表达上调，且与部分淋巴结搬运有关。
本研讨运用免疫安排化学办法对CDl47在57例肺鳞癌、腺癌中的表达进行了剖析。成果显现CDl47和VEGF-C在肺鳞癌和腺癌中高表达，阳性率别离为58.70%（27/46）、81.82%（9/11）和60.87%（28/46）、90.91%（10/11），二者之间无显着统计学差异。CDl47和VEGF-C在有淋巴结搬运组的阳性率别离为82.76%（24/29）、82.76%（24/29），显着高于无淋巴结搬运组42.86%（12/28）、50.00%（14/28）（P<0.05）；TNM分期Ⅲ+Ⅳ期组的阳性率别离为94.44%（17/18）、94.44%（17/18）显着高于I+Ⅱ期组的48.72%（19/39）、53.85%（21/39）。CDl47和VEGF-C的高表达与有无淋巴结搬运及TNM分期密切相关，而与患者年纪、性别、吸烟等临床要素及肿瘤安排类型、细胞分解程度无显着的相关性。本研讨成果显现有淋巴结搬运的患者和肿瘤后期的患者CDl47和VEGF-C的阳性表达率显着增高，阐明CDl47和VEGF-C与肺鳞癌、腺癌的侵袭和搬运才能正相关。与王莉等对CDl47的研讨及陈苏娟等对VEGF-C的研讨成果一起。
目前国内对CDl47和VEGF-C的彼此效果没有见文献报导。拂晓等在对膀胱移行细胞癌的研讨中发现，大都患者都存在CD147和VEGF一起表达，且两者呈正相关。Tang等实验标明，CDl47经过P13K-AKT途径调理VEGF的表达，然后加快肿瘤血管的生成。VEGF-C是VEGF宗族成员之一，能够调理肿瘤血管及淋巴管的生成，其首要效果是促进肿瘤淋巴管的生成。在本研讨中，笔者发现在肺鳞癌、腺癌中呈现CDl47和VEGF-C联合表达的份额较高，在36例CDl47阳性的病例中有30例VEGF-C表达阳性，二者表现出显着的正相关（P<0.01）。提示CDl47和VEGF-C这两种蛋白在肺鳞癌、腺癌中或许发挥协同效果，CDl47也或许上调VEGF-C的表达，促进肿瘤淋巴管的成长及肿瘤细胞的搬运。
综上所述，CD147和VEGF-C在肺鳞癌、腺癌中的表达与肿瘤的临床分期及淋巴结搬运联系密切，CD147和VEGF-C即能够作为独立要素也或许彼此协同促进肺鳞癌、腺癌的侵袭与搬运，二者均可作为判别肺癌预后的参阅目标。
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