徐森懋++黄亚玲
[摘要] 意图 调查儿童病毒性脑炎医治前后外周血淋巴细胞亚群的改动，评论外周血淋巴细胞亚群的改动对重症病毒性脑炎预后判别的含义。 办法 选取23例重型病毒性脑炎患儿为研讨目标，以重型病毒性脑炎患者年纪及性别为根据，1∶1配对选取轻型病毒性脑炎及正常体检儿童组成轻症组及对照组；流式细胞仪检测医治前后外周血淋巴细胞亚群百分比；轻型病毒性脑炎按脑炎惯例医治，重型者在惯例医治一起运用甲强龙冲击医治+大剂量IVIG医治；以出院时无显着神经系统反常归为预后杰出组，仍留传各种神经系统功用妨碍或逝世者归为预后不良组。 成果 重症组CD3+、CD4+T淋巴细胞百分比、CD4/CD8值较轻型组与对照组显着减低（P<0.01）；重型组CD8+T、CD19+B淋巴细胞百分比较轻型组与对照组显着升高（P<0.01）； CD16+、CD56+、NK细胞百分比各组之间差异无计算学含义。重型组预后杰出者CD8+T细胞百分比医治后显着低于医治前（P<0.01）；CD19+B细胞百分比显着低于医治前（P<0.01）；预后差组医治前后CD8+T、CD19+B细胞百分比无显着不同（P>0.05）。 定论 重症病毒性脑炎患儿存在T细胞和B细胞免疫功用紊乱；医治后CD8+T细胞百分比、CD19+ B细胞百分比无显着改动提示预后不良，甲强龙冲击+大剂量IVIG医治或许影响CD8+T细胞及CD19+ B细胞百分比。
[关键词] 病毒性脑炎；淋巴细胞亚群；预后；IVIG
[中图分类号] R725.1 [文献标识码] A [文章编号] 2095-0616（2014）24-14-05
Study on peripheral blood lymphocyte subsets in children with viral encephalitis
XU Senmao1 HUANG Yaling2
1.Department of Pediatric，Anqing Municipal Hospital，Anqing 246003，China；2.Department of Pediatric，the Affiliated Union Hospital of Huazhong Univercity of Science and Technology，Wuhan 430074，China
[Abstract] Objective To observe the changes of peripheral blood lymphocyte subsets in children with viral encephalitis before and after treatment；to study the significant of the prognosis of the changes of peripheral blood lymphocyte subsets. Methods 23 cases of severe viral encephalitis children were selected as the research object，according to the age and sex，1：1 light viral encephalitis and normal children composition and the control group before and after treatment in mild group；detection of peripheral blood lymphocyte subsets and the percentage of flow cytometry；light viral encephalitis by encephalitis conventional treatment，heavy application of methylprednisolone therapy with high-dose IVIG treatment at the same time in the conventional treatment；at discharge with no obviousneurological abnormalities into good prognosis group，still left over various neurological dysfunction or deathattributed to the poor prognosis group. Results The percentage of CD3+，CD4+T lymphocyte，CD4/CD8 value of the severe group was significantly lower than that of the light group and the control group（P<0.01）；The percentage of CD8+T，CD19+B lymphocyte in severe group increased significantly more than that of the light group and the control group（P<0.01）；no statistical differences between the percentages of CD16+，CD56+，NK cells in each group.The severe group have good outcome and the percentage of CD8+T cells after treatment was significantly lower than that before treatment（P<0.01）；the percentage of CD19+B cells was significantly lower than that before treatment （P<0.01）；the percentage of CD8+T，CD19+B cells of the poor prognosis group had no significant difference between before and after treatment（P>0.05）. Conclusion T cell and B cell immune function disorder exists in children with severe viral encephalitis；after treatment，the percentage of CD8+T cell and CD19+B cells had no obvious change indicates a poor prognosis，methylprednisolone+high dose IVIG treatment may affect the percentage of CD8+T cells and CD19+B cells.endprint
[Key words] Viral encephalitis；Lymphocyte subsets；Prognosis；IVIG
病毒性脑炎的病况发展及预后和机体的免疫功用联系密切。可是，病毒性脑炎患儿临床表现的轻重程度及预后是否与外周血T淋巴细胞亚群、B淋巴细胞及NK细胞改动存在相关性，有待进一步研讨。免疫调理剂（甲基强的松龙和IVIG）越来越多的运用于重症病毒性脑炎，但甲强龙冲击疗法和大剂量IVIG运用是怎么调理病毒性脑炎患儿机体的免疫状况，有待进一步研讨。本研讨运用流式细胞仪剖析技能检测医治前后外周血T淋巴细胞亚群、B细胞及NK细胞水平改动，评论病毒性脑炎的免疫学机制以及甲强龙冲击疗法和大剂量IVIG运用影响机体免疫功用的或许机制。
1 材料与办法
1.1 一般材料
病例来源于2009年6月～2012年12月安庆市立医院儿科收治的重型病毒性脑炎患儿23例，其间男14例、女9例，男女比例1.6∶1，年纪9个月～4岁，其间9～12个月3例，1～2岁10例，2～3岁7例，3～4岁3例。以重症患儿年纪及性别按1∶1配对选取轻症病毒性脑炎患儿23例为轻型组；体检中心正常体检儿童23例作对照组。
1.2 确诊规范
1.2.1 轻型病毒性脑炎确诊规范[1] （1）急性起病，发病前2周内有呼吸道感染或肠道感染病史，或清晰病毒感染病史，如手足口病、轮状病毒查看阳性；（2）有脑膜或脑本质危害的临床表现如脑膜影响征、精力症状、抽搐、肢体瘫痪、失语、认识妨碍等；（3）脑电图反常伴或不伴头颅CT/MRI查看反常；（4）腰穿脑脊液查看成果契合病毒性脑炎改动；（5）经病毒性脑炎医治惯例医治后有用或好转；（6）扫除其他中枢感染性疾病如化脓性脑膜炎、结核性脑膜炎、隐球菌性脑膜炎及肿瘤、中毒性脑病等。
1.2.2 重型病毒性脑炎分型规范[2] 确诊轻型病毒性脑炎，且契合以下2条及2条以上：（1）重复抽搐或惊厥继续状况；（2）呈现显着认识状况改动和精力症状如昏倒；（3）肢体运动功用妨碍，肌张力反常或瘫痪；（4）呈现脑干症状呼吸节律改动、无自主呼吸等。
1.3 医治办法
轻型组入院后惯例给予操控高热、操控抽搐（地西泮，苯巴比妥，咪达唑伦）、脱水降颅压（甘露醇，甘油果糖，呋塞咪）、抗病毒（利巴韦林，阿昔洛韦，更昔洛韦）等处理；重型组在惯例医治基础上给予甲基强的松龙（辉瑞制药有限公司，MG0629200509，0.5g/支）冲击医治[20mg/（kg·d），用药3d，减量至1～2mg/（kg·d），用药3～5d]，一起予大剂量IVIG（成都蓉生药业有限责任公司，S19993042，50mL/瓶）静脉输注[1g/（kg·d），用药2d]，频频惊厥者加用丙戊酸钠医治。
1.4 预后评价
出院时无显着神经系统反常者归为预后杰出组；出院时仍留传各种神经系统功用妨碍或逝世病例归为预后不良组。
1.5 外周血淋巴细胞亚群检测办法
搜集各组病例晨起空腹静脉血，重型组病例于甲强龙冲击+大剂量IVIG运用完毕7d后再次收集静脉血，由专人选用美国BD公司FACSCalibur流式细胞仪进行外周血淋巴细胞亚群检测，试剂CD45PERCP/CD3FITC/CD8PE/CD4APC及CD45PERCP/CD3FITC/CD16PE+CD56PE/CD19APC均源自美国BD公司。
1.6 计算学办法
运用SPSS13.0计算软件，树立数据库并进行计算学处理；计数材料选用百分比（%）标明，契合正态分布的计量材料测定成果用（）标明，多组比较选用单因素方差剖析（ANOVA），进一步两两比较选用LSD法，医治前后方差齐性的计量材料比较选用配对t查验；不满足正态分布的计量材料测定成果用中位数P50（P25，P75）标明，选用配对样本比较的Wilcoxon符号秩查验。P<0.05为差异有计算学含义。
2 成果
2.1 重型组12例（52.17%）预后杰出
11例（47.83%）预后不良，其间逝世1例，因无自主呼吸而不能脱机达30d家长抛弃医治1例，出院时确诊脑炎继发性癫痫6例（其间伴运动妨碍3例，伴智力后退2例），智力后退2例，语言妨碍1例。
2.2 各组间T淋巴细胞亚群比较
CD3+、CD4+T细胞百分比对照组、轻型组、重型组，差异不全相同，差异有计算学含义（P<0.01），其间，CD3+T细胞百分比轻型组较对照组比较差异无计算学含义（P>0.05），重型组较轻症组下降；重型组较对照组下降，差异有计算学含义（P<0.01）；CD4+T细胞百分比轻型组较对照组差异无计算学含义（P>0.05），重型组较轻症组下降，差异有计算学含义（P<0.01）；重型组较对照组下降，差异有计算学含义（P<0.01）。CD8+T细胞百分比和CD4+/CD8+值轻症组与对照组比较差异无计算学含义（P>0.05），重型组较轻症组显着升高，差异有计算学含义（P<0.01）；重型组较对照组显着升高，差异有计算学含义（P<0.01）。
2.3 各组间B淋巴细胞、NK细胞比较
CD19+B淋巴细胞 对照组、轻型组、重型组顺次增高（P<0.01），其间，轻型组较对照组无显着差异（P>0.05），重型组较轻型组显着增高（P<0.01）；重型组较对照组显着增高（P<0.01）；NK细胞CD16+、CD56+百分比对照组、轻型组、重型组间差异无计算学含义（P>0.05）。
2.4 预后好组医治前后各组外周血淋巴细胞亚群比较
预后好组医治后CD3+T细胞百分比较医治前上升（P<0.05），CD4+T细胞百分比、CD4+/CD8+较医治前上升，差异有计算学含义（P<0.01）；CD8+T细胞、CD19+B细胞百分比较医治前下降，差异有计算学含义（P<0.01）、NK细胞百分比医治前后差异无计算学含义（P>0.05），见表3。endprint
2.5 预后差组医治前后各组外周血淋巴细胞亚群比较
预后差组医治后CD3+T、CD4+T细胞百分比、CD4+/CD8+较医治前上升，差异有计算学含义（P<0.01）；CD8+ T细胞、CD19+B、NK细胞百分比医治前不同差异无计算学含义（P>0.05）。见表4。
3 评论
病毒性脑炎的急性期病理改动表现为很多病毒侵略脑安排后导致脑安排的直接损坏；一起宿主对病毒抗原发作激烈免疫反响，将进一步导致脱髓鞘、血管与血管周围脑安排危害。病毒性脑炎的病况发展及预后和机体的免疫功用联系密切，在本研讨中，重型组CD3+、CD4+T淋巴细胞百分比、CD4+/CD8+值较轻型组与对照组显着减低（P<0.01）；CD4+T细胞为辅助性淋巴细胞，首要效果是排泄细胞因子调理免疫系统中其他细胞的活性，Miao等[3]发现在严峻脑损害患者中CD3+、CD4+数量下降，CD4+T淋巴细胞百分比下降提示重症病毒性脑炎患儿机体免疫调理功用遭到按捺，然后致患儿免疫功用紊乱；一起，重型组CD8+T、CD19+B淋巴细胞百分比较轻型组与对照组显着升高（P<0.01）；CD8+T细胞的首要生物学效果为抗胞内微生物感染，发挥特异性杀伤靶细胞的功用，然后引起靶细胞的溶解与调亡，有利于病毒的铲除，但一起这种特异性杀伤靶细胞的功用若过度激活，也对脑安排危害形成严峻危害，有学者运用免疫细胞化学技能检测因继发严峻的局灶性癫痫而行手术医治单纯疱疹病毒性脑炎患儿的脑标本，发现脑本质有很多CD8+T淋巴细胞，并提出或许是因为T细胞介导的细胞毒性反响导致了单纯疱疹病毒性脑炎患者的脑损害[4]；孙广超等[5]报导危重症手足口病患儿表现为B细胞百分比显着升高。病毒感染改动了突宿主细胞膜的膜抗原，病毒抗原与宿主细胞的穿插免疫反响，CTL细胞导致病毒感染的神经细胞溶解后，溶解物作为抗原影响B细胞增殖并发生本身抗体从面引起神经安排的损害。数据标明CD16+、CD56+、NK细胞百分比各组之间差异无计算学含义。NK细胞无需抗原影响，无需预先致敏，具有直接杀伤靶细胞效应，且效果敏捷，在体外将NK细胞与靶细胞混合后4h内即可发挥杀伤效应，在体内NK细胞经过趋化效果集合至感染部位，在细胞因子的效果下活化，发挥杀伤靶细胞的效果，这种效果发作于特异性免疫反响之前乃至发作于病毒仿制之前，而在病毒感染中后期无显改动[6]。
在预后方面，重型者在惯例医治一起运用甲强龙冲击医治+大剂量IVIG医治后，重型组预后杰出者CD8+T细胞百分比医治后显着低于医治前（P<0.01）；CD19+B细胞百分比显着低于医治前（P<0.01）；预后差组医治前后CD8+T、CD19+B细胞百分比差异无计算学含义（P>0.05）。病毒侵略中枢神经系统之前已经过病毒血症感染到各器官，在部分安排对病毒感染发生炎症反响，发生各种细胞因子，当炎症反响过度时则可引起SIRS和（或）MODS[7]，而甲强龙冲击可有用按捺过度的炎症反响；徐娟等[8]研讨标明糖皮质激素运用后会呈现CD8+T细胞削减，用糖皮质激素的意图是削减过强的免疫反响对安排的损害，甲强龙的剂量一向有争议，在本研讨中选用大剂量甲强龙后有5例呈现消化道出血[9]，但对症处理后均好转，故用药剂量及机遇挑选十分重要，也值得进一步研讨评论；有研讨标明IVIG经过可下调患儿血中IL-6和TNF-α等损害性细胞因子水平，从面缓解脑安排的损害[10]，Amran等 [11]以为免疫球蛋白经过干涉细胞因子的发生而按捺T细胞活化与增殖，Dennert等[12]报导运用IVIG医治后李自普等研讨标明儿童重症病毒性脑炎运用丙种球蛋白后，其预后较未运用丙种球蛋白组显着要好，与本文有相似之处；有研讨标明大剂量IVIG输注有医治癫痫的效果，一起使体内IgG水敏捷增高，然后反应性按捺了CD19表达，继而到达免疫调理的效果[13]。
综上所述，重症病毒性脑炎患儿存在T细胞和B细胞免疫功用紊乱；甲强龙冲击+大剂量IVIG医治后，预后较好者CD8+T及CD19+B细胞细胞百分比医治后显着低于医治前（P<0.01）；预后差组医治前后CD8+T、CD19+B细胞百分比无计算学含义（P>0.05），然后估测甲强龙冲击+大剂量IVIG医治有或许影响患儿CD8+T细胞及CD19+B细胞百分比，对康复重症病毒性脑炎患儿反常的免疫状况有必定效果。
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（收稿日期：2014-08-18）endprint
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