黄满辉 张龙绘 李珍宇
[摘要] 意图 评论B族链球菌核酸检测在产前筛查中的运用价值。 办法 挑选2012年7月～2014年6月在我院产科门诊进行惯例产检、单胎宫内妊娠、胎儿存活的325例孕妈妈为研讨目标，于孕35～37周取阴道分泌物和肛周分泌物，别离进行细菌培育与实时PCR检测，调查两种检测办法检出作用，比较B族链球菌阳性、阴性对孕产妇妊娠结局及对新生儿结局的影响。 成果 325例孕妈妈中，B族链球菌细菌培育检出阳性13例（4%），实时PCR检测检出阳性29例（8.92%），特异度为94.9%，活络度为100.0%，阳性猜测值为44.8%，阴性猜测值为100.0%；B族链球菌阳性孕产妇宫内感染（13.79%）、胎膜早破（34.48%）、早产（10.34%）、产后出血（10.34%）均显着高于GBS阴性孕产妇（P<0.05）；B族链球菌阳性孕产妇所临产新生儿肺炎（6.9%）、新生儿败血症（6.9%）、新生儿困顿（13.79%）显着高于GBS阴性所临产新生儿（P<0.05）。 定论 妊娠晚期B族链球菌带着显着添加了孕产妇宫内感染、胎膜早破、早产、产后出血以及新生儿肺炎、新生儿败血症、新生儿困顿发作率，B组链球菌核酸检测试验用于产前检查有着重要的含义。
[关键词] B族链球菌；实时PCR检测；妊娠结局；新生儿结局
[中图分类号] R714.7 [文献标识码] B [文章编号] 2095-0616（2015）24- 81-04
[Abstract] Objective To study the application value on the nucleic acid detection of group B streptococcus in prenatal screening. Methods 325 pregnant women with single pregnancy intrauterine pregnancy and surviving fetus， who were carried on routine antenatal examination in obstetrical outpationt department of our hospital from July 2012 to June 2014， were selected as the research objects. To respectively carry on the bacterial culture and real-time PCR detection on the vaginal secretion and perianal secretion at 35-37 gestational weeks， to observe the detection effect between the two detection methods， to compare the effect of group B positive and negative streptococcus on the pregnancy outcome of pregnant women and neonatal outcome. Results Of the 325 pregnant women， the positive detection of bacterial culture in group B streptococcus were 13 cases（4%）， and the positive detection of real-time PCR detection were 29 cases（8.92%）， with the specificity of 94.9%， the sensitivity of 100.0%， the positive predictive value of 44.8%， and the negative predictive value of 100.0%. The intrauterine infection， the premature rupture of membranes， the premature delivery， and the postpartum hemorrhage in pregnant women with positive GBS（13.79%， 34.48%， 10.34%， 10.34%） were obviously higher than which in pregnant women with negative GBS （P<0.05）. Conclusion Group B streptococcus carried in late pregnancy have obviously increased the incidence of the intrauterine infection， premature rupture of membranes， premature delivery， postpartum hemorrhage， neonatal pneumonia， neonatal septicemia， and neonatal strccs in pregnant women. The application of nucleic acid detection of group B streptococcus in prenatal screening has important significance.
[Key words] Group B streptococcus； Real-time PCR detection； Pregnancy outcome； Neonatal outcome
B族链球菌学名无乳链球菌，是一种革兰阳性球菌，常寄生于阴道和直肠，是围产期感染中排在首位的致病菌[1]，可导致严峻的新生儿感染，也是孕产妇生殖道感染的重要病菌，易诱发泌尿道感染、产褥感染以及孕产妇败血症、早产，一起也易诱发新生儿脑膜炎、肺炎、败血症。美国疾病操控中心（CDC）报导均匀每年约为8000例新生儿感染B族链球菌，病死率约为5%，为此拟定了B族链球菌筛查和处理攻略[2-3]，极大下降了围产期B族链球菌的发作率。我国有关B族球菌感染的研讨较少，罕见的报导也提示B族链球菌或许是新生儿肺炎逝世的第一位致病菌[4]。传统的检测办法是规范细菌培育，至少需求24 ～ 48h才干完结，实时PCR检测整个操作过程只需2～4h，能很好地满意临产前检测的需求[5]。本文挑选325例孕妈妈为研讨目标，别离选用细菌培育与实时PCR检测的办法，评论实时PCR检测的运用价值以B族链球菌感染对孕产妇和新生儿结局的影响。endprint
1 材料与办法
1.1 一般材料
挑选2012年7月～2014年6月在我院产科门诊进行惯例产检、单胎宫内妊娠、胎儿存活的325例孕妈妈为研讨目标，年纪20～35岁，均匀（26.5±3.1）岁，其间经产妇20例，初产妇305例；孕周32～41周，均匀孕周（36.35±4.25）周。一切孕妈妈近期均无性交以及运用抗生素史，并悉数签署知情同意书。
1.2 办法
参照2002年美国疾病操控中心（CDC）引荐选材办法[6]，于孕35～37周期间对孕妈妈选材，先用2根消毒棉拭子置入阴道下1/3内取阴道分泌物，再用2根消毒棉拭子刺进肛门取直肠分泌物，别离用于细菌培育和实时PCR检测。
1.2.1 细菌培育 取阴道、直肠分泌物放入5%羊血培育基内，温度操控35℃，培育18～24h，取灰白、圆形可疑菌（革兰氏染色阳性链球菌、触酶试验阴性）接种培育16h，运用法国生物梅里埃VITEK-2细菌判定仪进行判定。
1.2.2 实时PCR检测 取阴道、直肠分泌物棉拭子置入1mL无菌清洗液中，室温下保存，24h检测。震动均匀，并充沛挤干棉拭子，将悉数液体吸入1.5mL离心管内，13000r/min，离心分离5min，弃除上清液，加50μL三羟基氨基甲烷-已二胺四乙酸缓冲液重悬，参加10μL内参照，参加提取固形物震动5min，离心后95℃加热2min后，当即冰浴5min，高速（13000r/min）离心1min，取上清液进行PCR扩增检测。关于实时PCR与细菌培育检测相异标本，选用第2对引物进行二次扩增测序的办法进行校对。实时PCR检测试剂选用福建泰普生物科技有限公司出产的试剂。
1.3 统计学处理
选用SPSS13.0对数据进行统计剖析，计数材料用频数（n）或率（%）标明，选用x2查验，P<0.05为差异有统计学含义。
2 成果
2.1 325例孕妈妈B族链球菌细菌培育与实时PCR检测剖析
以细菌培育成果作为金规范进行PCR检测成果比照。比照成果显现，325例孕妈妈中，B族链球菌细菌培育检出阳性13例（4%，13/325），实时PCR检测检出阳性29例（8.92%，29/325）。13例细菌培育检出阳性中，实时PCR检测均为阳性；别的16例细菌培育阴性患者，进行扩增测序及结合临床开展成果显现，14例为B族链球菌阳性，2例阴性。特异度为94.9%，活络度为100.0%，阳性猜测值为44.8%，阴性猜测值为100.0%。见表1。
2.2 B族链球菌阳性对孕妈妈妊娠结局的影响
B族链球菌阳性患者临产办法与阴性患者比较差异无统计学含义；GBS阳性孕产妇宫内感染（13.79%）、胎膜早破（34.48%）、早产（10.34%）、产后出血（10.34%） 均显着高于GBS阴性孕产妇（P<0.05）。见表2。
2.3 B族链球菌阳性对新生儿结局的影响
GBS阳性与阴性孕产妇所临产新生儿上呼吸道感染比较差异无统计学含义；GBS阳性孕产妇所临产新生儿发作新生儿肺炎（6.9%）、新生儿败血症（6.9%）、新生儿困顿（13.79%）显着高于GBS阴性所临产新生儿（P<0.05）。见表3。
3 评论
B族链球菌是一种寄生于泌尿生殖道及消化道的致病菌，不同区域、不同种族妊娠晚期妇女带菌率各有不同。1996年美国疾病操控中心（CDC）提出的防备和操控B族链球菌计划得到了美国儿科学会（AAP）、美国妇产科学会（ACOG）的认可[7]，清晰进步对一切孕周为35～37周的孕妈妈进行B族链球菌培育，对检出阳性患者进行防备性医治，据统计，这种防备和操控计划可以对26.7%的临产者进行防备性医治，可以防备86%的新生儿发作B族链球菌感染[8]。B族链球菌是围生期最重要的致病菌之一，可以上行感染胎膜。有文献研讨显现[9]，在很多围生期病原菌中，GBS关于绒毛膜的吸附才能和穿透才能最强，不光会引起细胞因子及前列腺素的开释，一起还会形成磷脂酶A2的升高，引发胎膜张力下降、安排水肿，然后形成胎膜早破及影响宫缩引起早产。
胎膜早破的产妇往往兼并有羊膜腔感染，但这在前期并无显着症状，病理学上确诊为绒毛膜羊膜炎，归于亚临床感染，如果能及时操控，则可以有用阻断感染的开展，改进妊娠结局。传统的细菌培育与判定时刻较长，大约需求24～48h，因为B族链球菌具有间歇性与短暂性的特色，并且免疫学的敏感性与B族链球菌含量有关，惯例35～37孕周链球菌培育筛查办法漏诊率较大，黄永建等[9]经过对445例妊娠晚期妇女B族链球菌细菌培育与实时PCR检测办法的比较研讨，证明实时PCR检测办法阳性率显着高于细菌培育阳性率。本文研讨成果标明，325例受检孕妈妈中，B族链球菌细菌培育阳性检出率4%（13/325），实时PCR阳性检出率8.92%（29/325），经过对细菌培育与实时PCR检出相异16例扩增测序检测，14例显现阳性，2例阴性，实时PCR敏感度100.0%（26/26），特异度99.38%（323/325），提示实时PCR检测具有快速、精确、活络、特异的特色，显现出更高的实用性和优越性。从本次成果来看，荧光实时PCR的敏感性及特异性均较高，契合临床查验需求，但也有学者研讨[10]指出，实时PCR查验费用较高是影响该计划遍及的一个重要要素，也是影响产前筛查大范围推行的一个阻止，而细菌培育则查验周期更长，两者各有好坏，可根据具体情况而定。
B族链球菌是广泛栽培于泌尿生殖道，并且与宿主严峻感染性疾病密切相关，研讨标明，如果在宫颈中发现很多B族链球菌，可诱发胎膜早破、早产、败血症等妊娠并发症，感染是胎膜早破的首要风险要素，B族链球菌对绒毛膜的穿透力和吸附力最强，王兆莉等[10]研讨标明，B族链球菌阳性孕妈妈产妇胎膜早破发作率32.00%（8/25）显着高于B族链球菌阴性患者19.27%（53/275）。既往研讨标明，B族链球菌感染是导致早产的重要原因之一[11]，孕妈妈发作B族链球菌感染后，将开释前列腺素、磷酯酶A、肿瘤坏死因子（TNF）以及白细胞介素IL-1、IL-6、IL-8、IL-12等，然后影响子宫缩短导致早产。本文研讨中，GBS阳性孕产妇宫内感染、胎膜早破、早产、产后出血均显着高于GBS阴性孕产妇，提示GBS感染或许与孕妈妈妊娠结局有必定的相关性。endprint
近20年来，B族链球菌已成为世界各国新生儿感染性疾病的首要病原菌，B族链球菌引起新生儿最常见的病变为新生儿脓毒血症，早发性B族链球菌感染极易诱发新生儿败血症、肺炎、脑膜炎，晚发性感染一般于产后一周乃至10d后开端发病[12-14]，有学者[15-16]经过对234例逝世新生儿肺安排B族链球菌检测，报导B族链球菌阳性检出率65%，以为B族链球菌是导致新生儿肺炎逝世的首要至致病菌。本文研讨中，实时PCR检出29例GBS阳性孕产妇所临产新生儿中，发作新生儿肺炎、新生儿败血症、新生儿困顿份额显着高于CBS阴性孕产妇所临产新生儿。从这一点来看，注重产前筛查成果，可以有用的防止新生儿疾病的发作，或做好防备措施，提早医治，改进新生儿预后。但整体来说，国内产前筛查的推行尚有短缺，遍及程度较低，这也是导致新生儿疾病发作率高的首要要素。因而主张相关部分加强该方面的宣教，在社区等当地做好推行，进步产前筛查率，完成优生优育。
综上所述，实时PCR检测办法检测B族链球菌具有快速、精确、活络、特异的特色，或许成为B族链球菌检测的惯例办法；B族链球菌阳性可显着添加孕产妇宫内感染、胎膜早破、早产、产后出血发作率，也导致新生儿肺炎、新生儿败血症、新生儿困顿发作率的添加，应引起满足的注重。
[参考文献]
[1] 蔡晓沂，钟镐镐，王秀艳，等.快速、精确的B族链球菌检测-即时荧光探针核酸扩增技能的运用[J].现代防备医学，2013，40（13）：2533-2535，2546.
[2] Sweet RL， Gibbs RS. Infectious diseases of the female genital tract[M]. 15th. Wolters Kluwer： Lippincott Williams & Wilkins， 2009：1-9.
[3] Van Dyke MK， Phares CR， Lynfied R， et al. Evaluation funiversal antenatal screening for group B streptococcus[J]. N Engl J Med， 2009，360（4）：2626-2636.
[4] 时春艳，曲首辉，杨磊，等.妊娠晚期孕妈妈B族链球菌带菌情况的检测及带菌对妊娠结局的影响[J].中白发产科杂志，2010，45（1）：12-16.
[5] 蔡晓沂，钟镐镐，王秀艳，等.快速、精确的B族链球菌检测-即时荧光探针核酸扩增技能的运用[J].现代防备医学，2013，40（13）：2533-2535，2546.
[6] Centers for Disease Control and Prevention. Prevention of perinatal group B strepococal disease Revised guidelines from CDC [J]. MMWR Recomm Rep， 2002，51（12）：1-22.
[7] 范爱萍，薛凤霞.需氧菌性阴道炎及其混合感染的临床特征剖析[J].中华妇产科杂志，2010，45 （12）：904-908.
[8] Mark P. Prevention of early-onset group B streptococcal disease in newborns[J]. Obstet Gynecol， 2003，102（2）：414-415.
[9] 黄永建，陈波，张勇，等. 孕晚期妇女B族链球菌PCR检测成果剖析[J].江西医药，2013，48（7）：581-584.
[10] 王兆莉，卢德梅，颜胜.孕妈妈临产期B族溶血性链球菌带菌与母婴感染的联系[J]. 齐齐哈尔医学院学报，2009，30（24）：3078-3079.
[11] Chaisilwattnan P， Monif GR. In vitro ability of the group B strepococi to inhibit gram-positive and gram-variable constituents of the bacterial flora of the female genital tract[J]. Infect Dis Obstet Gynecol，1995，79（3）：91-97.
[12] 左绪磊.妇产科感染[M].北京：公民卫生出版社，2000：255-258.
[13] 时春艳，曲首辉，杨慕，等.妊娠晚期孕妈妈B族链球菌带菌情况的检测及带菌对妊娠结局的影响[J].中华妇产科杂志，2010，45（1）：12-16.
[14] Verani JR，McGee L，Schrag SJ，et al .Prevention of perinatal group B streptococcal disease-revise guidelines from CDC，2010[J].MMWR Recomm Rep，2010，59（RR. 10）：31-36.
[15] 江敏，汪伟山.孕妈妈B族溶血性链球菌带菌情况与母婴预后的研讨[J].中华全科医学，2012，10（4）：506-508.
[16] 彭凤梅，何春梅，古素芬.孕妈妈生殖道B族链球菌阳性与胎膜早破发作的联系[J].现代确诊与医治，2015，26（2）：277-278.
（收稿日期：2015-10-26）endprint
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