谢海萍++++刘柳毅
[摘要] 意图 树立和进步骨刺胶囊的质量规范。 办法 选用显微辨别法对骨刺胶囊中的杜仲、牛膝、熟地和续断进行辨别；选用薄层色谱法（TLC）对骨刺胶囊中的独活、续断、牛膝和当归药材进行定性辨别。 成果 显微特征显着；树立了独活、续断、牛膝和当归药材的薄层辨别法，TLC斑驳明晰，重现性好，专特点强，阴性对照无搅扰。 定论 显微辨别办法操作简洁、精确牢靠，消耗少；TLC办法简洁可行，成果精确牢靠，重复性好，可作为骨刺胶囊的质量操控办法。
[关键词] 骨刺胶囊；质量规范；独活；续断；牛膝；当归
[中图分类号] R286.0 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2014）07（a）-0009-04
骨刺胶囊是由当归、鹿角胶、龟甲胶、杜仲、怀牛膝、熟地、威灵仙、独活、狗脊、续断等10味中药组成，具有补肾、益精健骨，祛风湿、通经络等成效，临床上首要用于腰及腰部以下部位骨质增生、腰间盘突出症[1-5]。原质量规范为企业规范，收载了杜仲和续断的显微辨别和杜仲、鹿角胶的理化辨别和狗脊的薄层辨别，且原规范的薄层辨别办法均存在阴性搅扰和重现性差等问题，故不行作为本产品的质量操控办法。为了能愈加有效地操控骨刺胶囊的质量，笔者对本品质量规范进行修订，删去了原规范中鹿角胶的理化辨别项和狗脊的薄层色谱辨别项，对杜仲和续断的显微特征进行了弥补和完善，并添加了牛膝和熟地的显微辨别项和独活、续断、牛膝和当归的薄层色谱辨别项。成果表明，树立的办法简洁、精确，重复性好，为该制剂树立可控的质量规范供给了根据。
1 仪器与试剂
1.1仪器
WFH-203B三用紫外分析仪（上海精科实业有限公司）；奥林巴斯显微镜；KQ3200B型超声波清洗器（常熟市双杰测验仪器厂）；JJ300型电子天平（昆山市超声仪器有限公司）。
1.2 试药
独活对照药材（120940-201111）、续断对照药材（121033-201110 ）、牛膝对照药材（121066-201106）、当归对照药材（120917-201014）均购自我国药品生物制品检定所；骨刺胶囊（规范：0.4 g/粒，批号：20130601、20130602、20130603）。薄层层析用硅胶G（青岛海洋化工有限公司）；薄层层析用硅胶GF254 （青岛海洋化工有限公司）。
2 办法与成果
2.1 显微辨别
取本品置显微镜下调查：可见胶丝，多散离，呈灰色（图1a-1）；石细胞成群或单个，类圆形、长圆形、类三角形，纹孔显着[6]（图1a-2，杜仲）。薄壁细胞内有很多草酸钙砂晶，使细胞边界不明晰[6]（图1b，牛膝）。另一种薄壁组织的细胞舒展，内含棕色物质[6]（图1c，熟地）。第三种薄壁细胞呈纺锤形，外表具有斜向交织的细纹路（图1d）；舒展的薄壁细胞中具有成行摆放的草酸钙簇晶[6]（图1e，续断）。
图1 骨刺胶囊粉末图（标尺为50 μm）
a.杜仲的显微辨别特征（1.胶丝；2.石细胞）；b.牛膝的薄壁细胞显微辨别特征；c.熟地的薄壁组织显微辨别特征；d.熟地呈纺锤形的薄壁细胞显微辨别特征；e.续断的薄壁细胞显微辨别特征
2.2 薄层辨别
2.2.1 独活的薄层辨别 取本品内容物5 g，加甲醇10 ml，超声处理15 min，静置，取上清液作为供试品溶液[6]。另取独活对照药材0.52 g，同法制成对照药材溶液。另取除掉独活按处方和工艺制得的阴性对照样品4.48 g，同法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法试验（《我国药典》2010版一部附录Ⅵ B），汲取上述3种溶液各5 μl，别离点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯（7∶3）为打开剂，打开，取出，晒干，置紫外光灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的方位上，显相同色彩的斑驳，阴性对照溶液相同方位无搅扰。成果见图2。
2.2.2 续断的薄层辨别 取本品内容物5 g，加水100 ml，加热回流30 min，滤过，滤液浓缩至10 ml，加在D101型大孔吸附树脂柱（内径为1.5 cm，柱高为10 cm）上，用水100 ml洗脱，弃去洗脱液，再用30%乙醇100 ml洗脱，弃去洗脱液，再用50%乙醇100 ml洗脱，弃去洗脱液，继用70%乙醇溶液200 ml洗脱，搜集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇2 ml使溶解，作为供试品溶液[7-9]。另取续断对照药材0.5 g，同法制成对照药材溶液。另取除掉续断按处方和工艺制得的阴性对照样品4.5 g，同法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法（《我国药典》2010版一部附录Ⅵ B）试验，汲取上述3种溶液各5 μl，别离点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-冰乙酸-水（4∶1∶5）的上层溶液为打开剂，打开，取出，晒干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105 ℃加热至斑驳显色明晰。在供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的方位上，显相同色彩斑驳。阴性对照溶液无此斑驳。成果见图3。
图3 续断薄层图谱（日光下）
1.供试品（批号：20130601）；2.供试品（批号：20130602）；3.供试品（批号：20130603）；4.续断对照药材；5.缺续断阴性对照
2.2.3 牛膝的薄层辨别 取本品内容物16.7 g，加70%乙醇120 ml，加热回流3 h，滤过，滤液蒸干，残渣加水30 ml使溶解，用三氯甲烷20 ml振摇提取，弃去三氯甲烷液，水层用水饱满的正丁醇振摇提取3次，每次20 ml，兼并正丁醇液，用正丁醇饱满的水20 ml洗刷，弃去水洗刷液，正丁醇液经恰当浓缩后，参加1 g中性氧化铝拌匀，挥尽溶剂，置中性氧化铝柱（100～200目，4 g，内径为10～15 mm，干法装柱）上，用乙酸乙酯-乙醇（4∶1）的混合溶液40 ml洗脱，弃去洗脱液，继用40 ml无水乙醇洗脱，搜集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1 ml使溶解，作为供试品溶液[10-13]。另取牛膝对照药材2 g，加70%乙醇50 ml，同法制成对照药材溶液。另取除掉牛膝按处方和工艺制得的阴性对照样品14.7 g，同法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法试验（《我国药典》2010版一部附录Ⅵ B），汲取上述3种溶液各15 μl，别离点于同一硅胶GF254薄层板上，以乙酸乙酯-乙醇（4∶1）为打开剂，打开，取出，晒干，置紫外光灯（254 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的方位上，显相同色彩的斑驳。阴性对照溶液相同方位无搅扰。成果见图4。
图4 牛膝薄层色谱（紫外254 nm）
1.供试品（批号：20130601）；2.供试品（批号：20130602）；3.供试品（批号：20130603）；4.牛膝对照药材；5.缺牛膝阴性对照
2.2.4 当归的薄层辨别 取本品内容物5 g，用1%NaHCO3 80 ml超声处理30 min，过滤，滤液用稀盐酸调pH=2～3，再用乙醚萃取3次（30、20、20 ml），兼并乙醚层，挥干乙醚，用甲醇1 ml溶解作为供试溶液[6，14-16]。另取当归对照药材1 g，加1%NaHCO3 30 ml，同法制得对照药材溶液。另取除掉当归按处方和工艺制得的阴性对照样品，同法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法（《我国药典》2010版一部附录ⅥB）试验，汲取上述供试品溶液、对照药材溶液各5 μl，别离点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷—二氯甲烷—乙酸乙酯—甲酸（4∶1∶1∶0.1）为打开剂，打开，取出，晒干，至紫外灯（365 nm）下检视。成果见图5。
图5 当归薄层色谱图（紫外 365 nm）
1.供试品（批号：20130601）；2.供试品（批号：20130602）；3.供试品（批号：20130603）；4.当归对照药材；5.缺当归阴性对照
3 评论
3.1 显微辨别
原质量规范中只收载了杜仲和续断的显微辨别，为了能愈加有效地操控骨刺胶囊的质量，对杜仲和续断的显微特征进行了弥补和完善，并添加了牛膝和熟地的显微辨别项。
3.2 独活、续断、牛膝和当归的薄层辨别
本辨别项均为添加项。在对方中悉数药材进行了薄层色谱辨别后，制订了重现性较好且无阴性搅扰的独活、续断、牛膝和当归为薄层色谱辨别内容，列入质量规范。对其他药材杜仲、熟地和威灵仙等都进行了薄层计划调查，但均因本品药味多，成分杂乱，相互搅扰严峻，而未能得到满足成果，故其薄层色谱辨别内容不列入质量规范。
[参考文献]
[1] 黄传俊，胡丽娅，杨茂文.骨刺胶囊的质量规范研讨[J].时珍国医国药， 2006，17（6）：1013.
[2] 胡世林，冯学锋，唐晓军.我国道地药材原色图说[M].济南：山东科学技术出版社，1998：196，211，348.
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[4] 刘桂双，李文军.骨刺消痛胶囊的质量规范研讨[J].中医药学报，2009，37（1）：45-48.
[5] 张湛睿，史亚军，姜建东，等.骨刺消痛胶囊质量规范研讨[J].陕西中医，2009，30（6）：726.
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[8] 袁玲艳，赵永慧，赵嘉琳，等.续断通络胶囊质量规范研讨[J].我国试验方剂学杂志，2012，18（2）：97.
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[10] 卢树杰，张纲，甄兰敏.舒筋通络颗粒中牛膝的薄层色谱辨别[J].我国药业，2010，19（6）：26.
[11] 黄荣增，孟军华，吴娟.根痛平胶囊的质量规范研讨[J].我国药师，2010， 18（4）：508.
[12] 金珠，位鸿，李秉钧，等.骨痹灵胶囊质量规范研讨[J].中成药，2005，27（5）：529-532.
[13] 杜天信，李洁，杜志谦，等.桃仁膝康丸质量规范研讨[J].国际中西医结合杂志，2011，6（6）：513.
[14] 陈岩，谢培山，颜玉贞.中华人民共和国药典中药薄层色谱五颜六色图集[M].广州：广东科技出版社，1993：110.
[15] 郭亮，郭剑华，马善治，等.膝舒胶囊质量规范研讨[J].有用中医药杂志，2012，28（12）：1070.
[16] 邓小玉，殷婵玉，赵吉平.少林风湿跌打膏质量规范研讨[J].湖北中医杂志，2012，34（2）：73.
（收稿日期：2014-04-16 本文修改：许俊琴）
图4 牛膝薄层色谱（紫外254 nm）
1.供试品（批号：20130601）；2.供试品（批号：20130602）；3.供试品（批号：20130603）；4.牛膝对照药材；5.缺牛膝阴性对照
2.2.4 当归的薄层辨别 取本品内容物5 g，用1%NaHCO3 80 ml超声处理30 min，过滤，滤液用稀盐酸调pH=2～3，再用乙醚萃取3次（30、20、20 ml），兼并乙醚层，挥干乙醚，用甲醇1 ml溶解作为供试溶液[6，14-16]。另取当归对照药材1 g，加1%NaHCO3 30 ml，同法制得对照药材溶液。另取除掉当归按处方和工艺制得的阴性对照样品，同法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法（《我国药典》2010版一部附录ⅥB）试验，汲取上述供试品溶液、对照药材溶液各5 μl，别离点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷—二氯甲烷—乙酸乙酯—甲酸（4∶1∶1∶0.1）为打开剂，打开，取出，晒干，至紫外灯（365 nm）下检视。成果见图5。
图5 当归薄层色谱图（紫外 365 nm）
1.供试品（批号：20130601）；2.供试品（批号：20130602）；3.供试品（批号：20130603）；4.当归对照药材；5.缺当归阴性对照
3 评论
3.1 显微辨别
原质量规范中只收载了杜仲和续断的显微辨别，为了能愈加有效地操控骨刺胶囊的质量，对杜仲和续断的显微特征进行了弥补和完善，并添加了牛膝和熟地的显微辨别项。
3.2 独活、续断、牛膝和当归的薄层辨别
本辨别项均为添加项。在对方中悉数药材进行了薄层色谱辨别后，制订了重现性较好且无阴性搅扰的独活、续断、牛膝和当归为薄层色谱辨别内容，列入质量规范。对其他药材杜仲、熟地和威灵仙等都进行了薄层计划调查，但均因本品药味多，成分杂乱，相互搅扰严峻，而未能得到满足成果，故其薄层色谱辨别内容不列入质量规范。
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[10] 卢树杰，张纲，甄兰敏.舒筋通络颗粒中牛膝的薄层色谱辨别[J].我国药业，2010，19（6）：26.
[11] 黄荣增，孟军华，吴娟.根痛平胶囊的质量规范研讨[J].我国药师，2010， 18（4）：508.
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[13] 杜天信，李洁，杜志谦，等.桃仁膝康丸质量规范研讨[J].国际中西医结合杂志，2011，6（6）：513.
[14] 陈岩，谢培山，颜玉贞.中华人民共和国药典中药薄层色谱五颜六色图集[M].广州：广东科技出版社，1993：110.
[15] 郭亮，郭剑华，马善治，等.膝舒胶囊质量规范研讨[J].有用中医药杂志，2012，28（12）：1070.
[16] 邓小玉，殷婵玉，赵吉平.少林风湿跌打膏质量规范研讨[J].湖北中医杂志，2012，34（2）：73.
（收稿日期：2014-04-16 本文修改：许俊琴）
图4 牛膝薄层色谱（紫外254 nm）
1.供试品（批号：20130601）；2.供试品（批号：20130602）；3.供试品（批号：20130603）；4.牛膝对照药材；5.缺牛膝阴性对照
2.2.4 当归的薄层辨别 取本品内容物5 g，用1%NaHCO3 80 ml超声处理30 min，过滤，滤液用稀盐酸调pH=2～3，再用乙醚萃取3次（30、20、20 ml），兼并乙醚层，挥干乙醚，用甲醇1 ml溶解作为供试溶液[6，14-16]。另取当归对照药材1 g，加1%NaHCO3 30 ml，同法制得对照药材溶液。另取除掉当归按处方和工艺制得的阴性对照样品，同法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法（《我国药典》2010版一部附录ⅥB）试验，汲取上述供试品溶液、对照药材溶液各5 μl，别离点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷—二氯甲烷—乙酸乙酯—甲酸（4∶1∶1∶0.1）为打开剂，打开，取出，晒干，至紫外灯（365 nm）下检视。成果见图5。
图5 当归薄层色谱图（紫外 365 nm）
1.供试品（批号：20130601）；2.供试品（批号：20130602）；3.供试品（批号：20130603）；4.当归对照药材；5.缺当归阴性对照
3 评论
3.1 显微辨别
原质量规范中只收载了杜仲和续断的显微辨别，为了能愈加有效地操控骨刺胶囊的质量，对杜仲和续断的显微特征进行了弥补和完善，并添加了牛膝和熟地的显微辨别项。
3.2 独活、续断、牛膝和当归的薄层辨别
本辨别项均为添加项。在对方中悉数药材进行了薄层色谱辨别后，制订了重现性较好且无阴性搅扰的独活、续断、牛膝和当归为薄层色谱辨别内容，列入质量规范。对其他药材杜仲、熟地和威灵仙等都进行了薄层计划调查，但均因本品药味多，成分杂乱，相互搅扰严峻，而未能得到满足成果，故其薄层色谱辨别内容不列入质量规范。
[参考文献]
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[5] 张湛睿，史亚军，姜建东，等.骨刺消痛胶囊质量规范研讨[J].陕西中医，2009，30（6）：726.
[6] 国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].北京：我国医药科技出版社，2010：67，116，124，154，246，309.
[7] 王晓一，周昕，陈剑.薄层辨别法定性辨别腰疼丸中续断、牛膝陈述[J].九江学院学报·自然科学版，2006，21（1）：82-83.
[8] 袁玲艳，赵永慧，赵嘉琳，等.续断通络胶囊质量规范研讨[J].我国试验方剂学杂志，2012，18（2）：97.
[9] 陈宁，韦英杰，周学敏，等.复方续断胶囊的质量规范研讨[J].我国新药杂志，2009，18（23）：2283.
[10] 卢树杰，张纲，甄兰敏.舒筋通络颗粒中牛膝的薄层色谱辨别[J].我国药业，2010，19（6）：26.
[11] 黄荣增，孟军华，吴娟.根痛平胶囊的质量规范研讨[J].我国药师，2010， 18（4）：508.
[12] 金珠，位鸿，李秉钧，等.骨痹灵胶囊质量规范研讨[J].中成药，2005，27（5）：529-532.
[13] 杜天信，李洁，杜志谦，等.桃仁膝康丸质量规范研讨[J].国际中西医结合杂志，2011，6（6）：513.
[14] 陈岩，谢培山，颜玉贞.中华人民共和国药典中药薄层色谱五颜六色图集[M].广州：广东科技出版社，1993：110.
[15] 郭亮，郭剑华，马善治，等.膝舒胶囊质量规范研讨[J].有用中医药杂志，2012，28（12）：1070.
[16] 邓小玉，殷婵玉，赵吉平.少林风湿跌打膏质量规范研讨[J].湖北中医杂志，2012，34（2）：73.
（收稿日期：2014-04-16 本文修改：许俊琴）
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